초파리에서 감염 전파 가능성을 평가하기 위한 박테리아 탈락 정량화

초록

출처: Siva-Jothy, J. A. 외, 초 파리 멜라노가스터의 구강 세균 감염 및 탈모. J. Vis. 경험 (2018)

이 영상은 감염된 파리를 여러 개의 먹이 포함 관에 걸쳐 옮기고, 탈락한 박테리아를 회수하며, 연속 희석과 플레이트링을 통해 생존 가능한 군락을 정량화하는 과정을 통해 초파리 에서 박테리아 탈락을 모니터링하는 절차를 시연합니다.

프로토콜

1. 박테리아 배출 측정
   1. 내부 하중과 함께 탈락 정도를 측정하세요.
   2. 감염 후에는 단일 플라이를 1.5mL 마이크로 원심분리관에 50 μL 루이스 배지를 들어 24시간 동안 옮깁니다.
   3. 내부 하중 측정을 위해 플라이를 제거하고, 100 μL 1x PBS(인산염 완충 식염수)로 3초 동안 강한 소용돌이 방식으로 세척합니다.
   4. 이 세척에서 군락 형성 단위(CFU)를 LB(루리아-베르타니) 영양 한천에 플레이트하여 측정하세요.
   5. 감염 후에는 단일 플라이를 1.5mL 마이크로 원심분리관에 50 μL 루이스 배지를 들어 24시간 동안 옮깁니다.
   6. 파리를 새로운 미세원심분리관에 ~50 μL 루이스 배지를 넣어 24시간 더 옮깁니다. 오염된 튜브를 100 μL 1x PBS로 3초 동안 강하게 소용돌이 상태로 세척하세요.
   7. 이 세척에서 CFU를 LB 영양용 한가로 플레이트해 측정하세요.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
바이알	사스테트 주식회사	58.49	폴리스티렌 플랫베이스 튜브 75mm x 23.5mm, 23ml
아가르	시그마-올드리치	A7002	한천, 물푸레나무 2.0-4.5%
갈색 설탕	비드베스트	66032	연한 갈색 연설탕
옥수수	도브스 팜		유기농 옥수수 가루
페르미판 효모	비드베스트	96360	건조하고 즉석 효모
페트리 접시	피셔 사이언티픽 UK Ltd.	15788517	X600 페트리 접시 90 x 16.2MM 멸균 트리플 벤트
에펜도르프 튜브 (1.5ml)	사스테트 주식회사	72.690.001	사스테트 마이크로 튜브 원뿔형 베이스 푸시 캡 1.5ml 표준 중성
에탄올	VWR 인터내셔널 주식회사	20821.33	에탄올 절대 아날라 NP ACS/R.PE - 분석 등급
LB 육수, 밀러	피셔 사이언티픽 UK Ltd.	BP1426	트립톤 10g, 효모 추출물 5g, 염화나트륨 10g/리터당 함유
96웰 마이크로플레이트	과학 실험실 용품 주식회사	353072	Falcon 96 웰 클리어 플랫 바텀 TC 처리된 폴리스티렌 세포 배양 마이크로플레이트 덮개 무균
소용돌이	피셔브랜드		월리믹서 75W 50-6-Hz 220-240V
10 μL 피펫 팁	그레이너 바이오원 주식회사	741015	길슨 스타일로 충분히 그렇죠. 졸업, 정리, 재충전, 960명
200 μL 피펫 팁	그레이너 바이오원 주식회사	741065	길슨 스타일로 충분히 그렇죠. 졸업, 정리, 재충전, 960명
1000 μL 피펫 팁	그레이너 바이오원 주식회사	741045	길슨 스타일로 충분히 그렇죠. 졸업, 정리, 재충전, 960명
20 μL 여과 피펫 팁	그레이너 바이오원 주식회사	774288	필터 팁 길슨 스타일. 투명, 랙 블루, 단일 포장, R/Dnase 프리, 96개 10개 랙
200 μL 여과된 피펫 팁	그레이너 바이오원 주식회사	739288	필터 팁 길슨 스타일. 투명, 랙 블루, 단일 포장, R/Dnase 프리, 96개 10개 랙
1000 μL 여과 피펫 팁	그레이너 바이오원 주식회사	740288	필터 팁 길슨 스타일. 투명, 랙 블루, 단일 포장, R/Dnase 프리, 60개 10개 랙