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동물 모델이 포함된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 심사 위원회에서 검토되었습니다.
1. 슈도모나스 아에루기노사 접종
- 100 μg/mL 카르베니실린이 포함된 75mL 용해성 육수(LB) 배지에 PAO1:lux 배양물을 OD600 = 0.05로 하룻밤 희석하고, 배양물이 초기 지수적 단계(OD600≈0.3)에 들어갈 때까지 배양합니다. 이 과정은 약 2–3시간이 걸릴 것입니다.
- PAO1:lux를 인산염 완충식염수(PBS)에 희석하여 (7.5 ± 2.5) x 102 CFU/mL 농도로 만듭니다. 충분한 부피를 확보하고 실험 후 도금할 수 있도록 과잉 접종량을 반드시 준비하세요. 시설 간 운송 시 생물학적 위험물(Biohazard)라고 명확히 표시된 누출 방지 상자에 이중 격리를 사용하세요.
- P . aeruginosa 와 쥐를 대상으로 동물 생물안전 등급 2(ABSL-2) 승인 생물학적 안전 캐비닛(BSC)에서 승인된 개인 보호 장비를 사용하여 수행하십시오. 체중계와 같은 재사용 가능한 장비는 오염을 방지하기 위해 랩으로 덮어야 합니다.
- 3% 이소플루란으로 마취하세요. 마우스 무게를 재고 무게를 기록하세요. 양측 옆구리에 250 μL씩 미리 가열된 멸균 0.9% 염화나트륨을 피하 주입하여 총 500 μL를 투여합니다.
- 만약 쥐의 투명 필름 드레싱이 하룻밤 사이에 벗겨졌다면, 생긴 딱지를 조심스럽게 제거하고 새 드레싱을 덧발라.
- 500 μL 투베르쿨린 27G 안전 캡 주사기를 사용해 투명 필름 드레싱을 통해 각 상처에 PAO1:lux 현탁액 40 μL을 주입합니다. 반대쪽에서 교차 오염을 방지하기 위해 비접종/PBS 상처 대조제에는 다른 쥐를 사용해야 합니다.
- 마우스를 다시 케이지에 넣고 온열 패드 위에 올려놓고 켜보세요. 모든 쥐는 교차 오염을 방지하기 위해 별도의 우리에 개별적으로 보관해야 합니다.
- 우리 바닥에 고칼로리 영양 보충제를 먹이 펠릿 사이에 끼워 놓으세요.