방법 논문

식물 RNA 침묵을 억제하는 병원체 효과자를 선별하기 위한 공동 침윤 분석법

2026년 1월 30일

이 논문에서

초록

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

출처: Shi, J. 외. 식물 병원체의 분비 효과자로부터 RNA 침묵 억제제의 스크리닝 및 확인. J. Vis. 경험 (2020)

이 영상은 Nicotiana benthamiana 16c에서 RNA 침묵을 억제하는 병원체 효과 단백질을 규명하기 위한 공동 침투 분석 방식을 보여줍니다. 형광 리포터와 후보 효과기 유전자가 아그로박테리움 을 통해 식물 잎에 전달됩니다. 일반적으로 RNA 침묵은 보고자 전사체를 분해하여 형광을 감소시킵니다. 억제 효과기가 이 반응을 차단하여 형광을 보존합니다. 이 분석법은 숙주 방어를 방해하는 미생물 효과자를 빠르고 시각적으로 스크리닝하는 방법을 제공합니다.

프로토콜

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

공침윤 Nicotiana benthamiana 잎

  1. 35S-GFP를 포함한 아그로박테리움 배양물과 35S-오이 모자이크 바이러스 억제자 2b(CMV2b), 추정 효과자, 또는 빈 벡터(EV)를 포함한 아 그로박테리움 배양물을 같은 부피로 혼합합니다.
  2. N . benthamiana 16c 잎의 복측 면에 있는 혼합 아그로박테리아 현탁물을 1mL 바늘 없는 주사기를 사용해 조심스럽고 천천히 침투하세요.
  3. 부드러운 조직 와이퍼로 잎에 남아 있는 박테리아 부유물을 제거하고, 침투한 부위의 가장자리를 메이커 펜으로 원을 그리세요.
  4. 침투한 식물은 같은 성장 조건에서 성장실에 두세요.

    참고: 안전과 건강상의 이유로 침투 시 보호용 안경과 마스크를 착용해야 합니다. 교차 오염을 방지하기 위해 침투 사이에 장갑을 교체하거나 에탄올로 소독해야 합니다. 일반적으로 침투를 위해서는 잎당 최소 1mL의 아그로박테리움 현탁액이 필요합니다. 전신 침묵을 위해서는 침투를 위해 최소 두 개의 잎이 필요합니다.

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RNAGFPNicotiana benthamianasiRNA RISC

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