모기 중장에서 박테리아 분리

초록

출처: Liu, X. 외. 항생제 처리된 모기를 이용한 박테리아 경구 먹이 검사. J. Vis. 경험 (2020)

이 영상은 모기 중장 해부를 통해 장내 박테리아를 분리하는 과정을 보여줍니다. 중장은 소화관에서 추출되어 균질화되어 박테리아를 방출한 후 영양 한천 위에 플레이트되어 박테리아 집락을 배양합니다.

프로토콜

1. 모기 중장 해부하세요
   1. 표면에서 멸균된 모기를 멸균된 1x 인산염 완충식염수(PBS) 완충제액 한 방울로 유리 슬라이드 위에 옮깁니다. 해부 현미경 아래에서 해부하세요.
   2. 해부 현미경의 낮은 배율 아래에서 모기의 다리, 날개, 머리를 조심스럽게 제거하여 도망가지 못하게 하세요. 모기의 마지막 부분은 잡아당기지 않고 직접 자르면서 제거하여 소화관이 파손되는 것을 방지하세요.
   3. 모기의 가슴과 복부 끝을 겸자로 집고. 모기의 소화관을 부드럽게 꺼내세요. 후천된 소화관에는 보통 작물관, 앞장, 중장, 후장, 그리고 말피기관이 포함됩니다.
   4. 해부 현미경을 더 높은 배율로 조정하세요. 해부된 소화관에서 작물관, 앞장관, 후장관, 말피기관을 제거하여 모기의 중장을 확보합니다.
   5. 작물을 제거할 때는 주의하세요. 모기가 설탕을 먹으면 작물이 부풀어 올라 중장처럼 변하기 때문입니다. 말피기관은 길고 가느다란 배설관들의 집합으로, 중장과 후장의 경계에 위치해 있습니다.
2. 장내 박테리아를 분리합니다
   1. 해리된 중장을 멸균 1.5mL 튜브에 200 μL 멸균 1x PBS 완충액을 넣어 옮깁니다.
   2. 중장을 멸균된 벤치에서 멸균 공약으로 꼼꼼히 갈아 장내 박테리아가 완충제로 완전히 방출되도록 하세요.
   3. 동질을 10배 희석 3회로 연속적으로 희석합니다. 각 희석액 50 μL을 LB(루리아 육수) 한천 플레이트에 추가하고 플레이트에 바릅니다. 중장에 장내 미생물군이 높은 농도를 가지고 있다면, 단일 군락을 구별하기 위해 더 많은 연속 희석이 필수적입니다.
   4. 판을 37°C에서 1–2일간 배양하여 단일 군락이 보일 때까지 보관합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
이집트 에이데스			암컷 모기
원심분리관	상곤 바이오텍	F601620-0010	1.5mL, 자연산, 눈금, 멸균
일회용 조직 분쇄 공약	상곤 바이오텍	F619072-0001	70 mm 길이, 원뿔형, 파란색, 불임
겸자	후륜구동	F11029	해부
LB 한천 가루	상곤 바이오텍	A507003	트립톤 10.0g, 효모 추출물 5.0g, NaCl 10.0g, 한가15.0g.
현미경	자이스	스테미508
10배 PBS 버퍼	상곤 바이오텍	E607016	이 제품은 10배 해결책입니다. 사용 전에 10번 희석해 주세요. pH 수치는 7.4입니다.