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동물 모델이 포함된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 심사 위원회에서 검토되었습니다.
생물발광을 이용한 감염 시각화
- 감염 진행 상황을 시각화하기 위해, 검사된 Pseudomonas aeruginosa PGN5 및 VE2 균주에 염색체 생물발광 오페론(luxCDABE)을 삽입합니다. 이 균주들을 표지하는 데 사용된 플라스미드와 프로토콜은 Schweizer 연구실에서 개발되었으며, 모든 박테리아 종/균주와 호환되지 않을 수 있습니다. 중요한 점은 감염 시각화가 선택 사항이라는 것입니다; 따라서 사망률 연구를 수행하는 데 이 오페론의 유전체 삽입은 필수가 아닙니다.
- 품종을 준비하고 검증하세요. 또한, 각 검증 단계에서 표지된 균주에서 생물발광 여부를 확인하세요.
- 균주를 준비한 후, 위 단계에 따라 생물발광 균주와 함께 10마리씩 동물을 주입합니다.
- 생물발광이 가능한 동물 영상 시스템을 사용해 3시간마다 24시간 동안 동물들을 촬영합니다.
- 먼저, 카메라 파라미터를 설정하고 동물을 위해 무대를 가열하여 이미저를 준비합니다. 그 다음 산소 유량을 분당 1.5L로 설정하거나(제조사 권장 사항을 따르세요).
- 영상기와 스테이지가 안정화된 후, 주사 직후 한 마리 마우스를 마취실에 넣고 약 4분간 산소 흐름 과 함께 3.5% 이소플루란을 투여합니다. 마취 방법은 사용되는 챔버 및/또는 마취제에 따라 달라질 수 있습니다; 제조사의 권장사항을 따르세요. 금단 반사 검사를 통해 적절한 마취를 판단하세요.
- 마우스를 온도 안정화 단계로 옮기세요. 마우스를 등을 대고 팔을 뻗은 상태로 눕히고, 영상 검사 동안 2.5% 아이소플루란을 투여할 수 있도록 코 콘을 착용하세요.
- 문을 닫고 생물발광 사진과 쥐의 엑스레이를 찍어.
- 영상이 끝나면 마우스를 다시 케이지로 돌려보내고 모니터링하세요. 쥐는 3-5분 이내에 의식을 되찾을 것입니다.
- 쥐를 3시간마다 24시간 동안 촬영하며, 각 그룹의 다른 마우스를 사용해 촬영합니다. 마취 재노출로 인한 부작용 가능성 때문에 24시간 이내에 마우스를 재촬영하지 마십시오. 한 마리 쥐는 24-36시간마다 한 번만 마취를 받아야 합니다. 각 마우스를 이미징한 후 이미징 플랫폼을 깨끗이 청소하세요. 영상 시점 사이에 이미저를 끄세요.
참고: 주입된 균주와 상관없이 생물발광은 사라집니다. 생물발광의 강도와 지속 시간은 주입된 박테리아 수, 쥐 균주, 박테리아 균주 등 여러 요인에 따라 달라집니다.