생물발광을 이용한 쥐 모델에서 요로 감염의 시각화

Abstract

출처: Luyts, N. 외. 생체발광 영상을 이용한 요로 감염 및 그 치료에 대한 종단 추적 관찰. J. Vis. 경험 (2021).

이 영상은 방광에 주입된 생물발광성 대장균 을 이용해 쥐 모델에서 요로 감염을 유도하고 추적하는 과정을 시연하며, 박테리아의 부착, 침입, 세포 내 복제가 이루어집니다. 생물발광 오페론에서 방출되는 빛은 감염 진행 중 박테리아 부하를 실시간으로 측정하는 지표 역할을 합니다.

Protocol

동물 모델이 포함된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 심사 위원회에서 검토되었습니다.

1. 동물 접종

1. 동물 준비
   1. 연구 질문과 노크아웃 라인의 가용성, 실험 세부사항, 요로감염 감수성 차이에 따라 원하는 마우스 품종을 선택하세요. 암컷 쥐는 요도 도관 삽입이 더 쉽다는 점을 기억하세요. 8주 미만의 동물은 면역학적으로 미성숙하므로 사용하지 마세요. 여기서는 12주 된 암컷 C57Bl/6J 마우스를 사용했습니다.
   2. 동물들은 미리 주문하고 이상적으로는 7일 정도 적응시키세요. 개별 환기가 되는 우리에 그룹으로 키우며, 표준 12시간 밝고 어두운 조건 하에 있습니다.
   3. 동물의 복부 부위를 밀어 신호 손실을 최소화하세요. 제모 크림은 동물의 피부를 빠르게 데일 수 있으므로 사용하지 마세요. 비우세 손으로 목덜미와 뒷다리를 단단히 잡고 우세 손으로 면도를 하여 동물을 제압하세요. 또는 이소플루란 마취 하에서 면도하세요.
      참고: 동물들은 영상 촬영 2일 전에 면도했는데, 이는 동물들이 면도한 부위를 더 미용할 것이기 때문입니다.
   4. 실험 내내 물과 표준 음식을 자유 롭게 제공하세요. 하지만 주입 2시....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
마취 증기 발생기	하버드 장치 제한	해당 없음	https://www.harvardapparatus.com/harvard-apparatus-anesthetic-vaporizers.html
베이트릴 100 mg/mL	바이엘	해당 없음	엔로플록사신
BD 인사이트 오토가드 24 GA	BD	382912	노란색 피관관, 삽입할 때는 멸균 플라스틱 팁을 사용하세요
C57Bl/6J 마우스	장비에	해당 없음
원심분리기 5804R	에펜도르프	EP022628146
드롭센스 16	언체인드 랩스	트리네	외경 600nm를 측정하기 위해
둘벡코의 인산염 완충 식염수, 깁코	서모피셔 사이언티픽	참고 14040-083
에탄올 70% 변성 5L	VWR 인터내셔널	85825360
팔콘 14ml 둥근 바닥 폴리스티렌 튜브, 스냅캡	코닝	352057
팔콘 50ml 셀스타트	그라이너	227285
해밀턴 가스타이트 주사기, PTFE 루어 잠금장치, 100 μL	시그마-올드리치	26203	50 μL의 느린 박테리아 주입을 보장하기 위해
접종 루프	로스	6174.1	홀더: 예술. 번호 6189.1
Iso-Vet 1000mg/g	데크라 수의학 제품	해당 없음	이소플루란
IVIS 스펙트럼 생체 영상 시스템	퍼킨엘머	참고124262	영상 장치