박테리아 감염 시각화를 위한 마우스 방광 조직 준비

Abstract

출처: O'Brien, V. P. 외, 쥐에서 Gardnerella vaginalis의 방광 노출로 유발된 재발성 대장균 요로 감염. J. Vis. Exp. (2020)

이 영상은 감염 전 생쥐 모델의 방광 상피에서 박테리아 정착과 숙주-병원체 상호작용을 시각화하기 위해 주사 전자현미경을 사용해 시연합니다.

Protocol

동물 모델이 포함된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 심사 위원회에서 검토되었습니다.

1. 주사 전자현미경을 이용한 방광 영상

   참고: 이 절차는 요상피의 시각화가 필요한 시점에 언제든지 시행할 수 있습니다. 그림 1 (보라색 상자)에 나타난 바와 같이, 요로병원성 대장균 (UPEC)과 요로피 상호작용은 UPEC 접종 후 6시간에서 24시간 사이에 저장소 형성 단계에서 가장 잘 관찰되며, Gardnerella vaginalis 에 의해 유발되는 요로피 탈출은 두 번째 G . 질 노출 후 3시간에서 12시간 사이에 가장 잘 관찰됩니다.

   1. 현장 방광 고정
      1. 방광 수확 직전에 pH 7.4_{에서 2} mM CaCl2와 함께 0.15M 카코딜레이트 나트륨 완충제에 글루타알데히드(2.5% 최종 알코올)와 파라포름알데히드(2% 최종 포함)를 첨가하여 고정제를 준비합니다. 새로 개봉한 유리 앰플에서 파라포름알데히드와 글루타알데히드를 사용하세요. 두 고정제 모두 개봉 용기에서 시간이 지나면서 ....

Results

그림 1. 마우스 모델 회로도. 타임라인은 프로토콜 에 명시된 모델의 단계나 절차를 반영하기 위해 강조되어 표시됩니다. 1단계(주황색): 세포 내 요로병원성 대장균 (UPEC) 저장소 구축. 쥐에게는 UPEC를 경요도 예방접종을 받고, 소변 샘플을 수집하여 세균뇨 제거를 모니터링합니다. 박테리아를 제거하는 쥐만이 다음 단계로 진행됩니다. 2단계(녹색): 방광 노출 가 드네렐라 보지날리스. 쥐는 G........

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
30G x 1/2 바늘	BD	305106	카테터에 대해서는
5 1/2" 직선 겸자 제혈기	맥케슨	487377	현장 방광 고정
ACE 600 스퍼터 코팅기	라이카		SEM 샘플 처리
알루미늄 SEM 스텁	테드 펠라	16111	SEM 샘플 처리
염화칼슘	응급의료 서비스	12340	현장 방광 고정
전도성 탄소 접착 탭	테드 펠라	16084-1	SEM 샘플 처리
전도성 은색 페인트	테드 펠라	16034	SEM 샘플 처리
CPD 300 크리티컬 포인트 건조기	라이카		SEM 샘플 처리
사이토퍼널 금속 클립	수입	M964B	사이토스펀 요검사
에탄올	응급의료 서비스	15050	SEM 샘플 처리
포도당	시그마	G7528	NYCIII G. 질성 성장 매개체에 대해
글루타알데히드	응급의료 서비스	16320	현장 방광 고정
Hema 3 스테인닝 키트	피셔	23123869	사이토스펀 소변분석(Cytospun urinalysis)
젠장	셀그로	25-060-CL	NYCIII G. 질성 성장 매개체에 대해
이리듐	테드 펠라	91120	SEM 샘플 처리
멀린 FE-SEM	자이스		주사 전자현미경
밀리-Q 정수기	밀리포어	IQ-7000	SEM 샘플 처리
오스뮴 테트록사이드	응급의료 서비스	19170	SEM 샘플 처리
파라포름알데히드	응급의료 서비스	15710	현장 방광 고정
폴리에틸렌 튜빙	내부 구급	427401	카테터를 위한
프로테오스 펩톤 #3	피셔	DF-122-17-4	NYCIII G. 질성 성장 매개체에 대해
PTFE 코팅 양날 면도날	응급의료 서비스	72000	SEM을 위한 블래더 절단