숙주-병원체 상호작용 연구를 위한 용혈성 황색포도상구균 배양 준비

초록

출처: Behera, R.K. 외, 감염된 조직에서 박테리아 유전자 조절을 연구하는 형광 기반 방법. J. Vis. 경험 (2019)

이 영상은 숙주-병원체 상호작용 연구를 위한 박테리아 성장 표준화와 대사 동기화를 달성하기 위해 용혈성 황색포도상구균 배양을 준비하는 과정을 보여줍니다.

프로토콜

1. 박테리아 접종제 제제
   1. 냉동 글리세롤 육수에서 혈액 한천 플레이트에서 분리되는 관심 있는 스트릭 포도상구균 균주. 37°C에서 16–24시간 배큐하여 적혈구(적혈구)를 용해하고 투명한 투명 영역을 형성하는 능력에 기반한 용혈성 표현형을 확인한다.
   2. 멸균 유리관에 각 균주별 단일 군락을 4mL의 트립산 대두 육수(TSB)에 접종하여 야간 배양을 시작하세요. 튜브 롤러를 약 70° 각도, 분당 70회전(RPM)으로 설정한 튜브 롤러에서 37°C에서 16–24시간 동안 회전시킵니다.
   3. 분광광도계를 사용해 2.1.2단계의 배양 600nm(외경₆₀₀)에서 광학 밀도를 측정합니다. 멸균 매체를 광학 기준으로 사용하세요(빈칸). 이 세포들을 25mL의 멸균 트립틱 대두육수(TSB)에 각각 125mL DeLong 플라스크(플라스크 대비 5:1)에 넣어 OD_{600 0.05} 로 희석하고, 배양물을 280 RPM으로 흔들고 37 °C에 맞춰 배양물을 배양합니다.
      참고: 접종체의 성장은 여러 가지 방법으로 이루어질 수 있습니다; 세포를 지수적 위상으로 성장시키는 한 가지 방법이 제시됩니다. 그럼에도 불구하고, 세포를 예방접종을 준비하는 데 일관되게 같은 방법을 사용하는 것이 중요합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
양 피 5%	하디 다이애그노스틱스(캘리포니아주 산타 마리아)	A10
궤도 흔들기 수욕	뉴브런즈윅 이노바	NA
트립틱 두이 육수	VWR	90000-376
자외선 가시광선 분광광도계	벡만 쿨터-DU350	NA