숙주-병원체 상호작용 연구를 위한 용혈성 황색포도상구균 배양 준비

이 논문에서

초록

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이 영상은 숙주-병원체 상호작용 연구를 위한 박테리아 성장 표준화와 대사 동기화를 달성하기 위해 용혈성 황색포도상구균 배양을 준비하는 과정을 보여줍니다.

프로토콜

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박테리아 접종제 제제
1. 냉동 글리세롤 육수에서 혈액 한천 플레이트에서 분리되는 관심 있는 스트릭 포도상구균 균주. 37°C에서 16–24시간 배큐하여 적혈구(적혈구)를 용해하고 투명한 투명 영역을 형성하는 능력에 기반한 용혈성 표현형을 확인한다.
2. 멸균 유리관에 각 균주별 단일 군락을 4mL의 트립산 대두 육수(TSB)에 접종하여 야간 배양을 시작하세요. 튜브 롤러를 약 70° 각도, 분당 70회전(RPM)으로 설정한 튜브 롤러에서 37°C에서 16–24시간 동안 회전시킵니다.
3. 분광광도계를 사용해 2.1.2단계의 배양 600nm(외경₆₀₀)에서 광학 밀도를 측정합니다. 멸균 매체를 광학 기준으로 사용하세요(빈칸). 이 세포들을 25mL의 멸균 트립틱 대두육수(TSB)에 각각 125mL DeLong 플라스크(플라스크 대비 5:1)에 넣어 OD_{600 0.05} 로 희석하고, 배양물을 280 RPM으로 흔들고 37 °C에 맞춰 배양물을 배양합니다.
  참고: 접종체의 성장은 여러 가지 방법으로 이루어질 수 있습니다; 세포를 지수적 위상으로 성장시키는 한 가지 방법이 제시됩니다. 그럼에도 불구하고, 세포를 예방접종을 준비하는 데 일관되게 같은 방법을 사용하는 것이 중요합니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름

회사

카탈로그 번호

양 피 5%

하디 다이애그노스틱스(캘리포니아주 산타 마리아)

A10

궤도 흔들기 수욕

뉴브런즈윅 이노바

트립틱 두이 육수

VWR

90000-376

자외선 가시광선 분광광도계

벡만 쿨터-DU350

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