1. 인간 대변 미생물군에 의한 외계다당류(EPS) 분해<ol><li>0.2 μL의 발효 상청액을 미리 코팅된 실리카 겔-60 얇은 층 크로마토그래피(TLC) 알루미늄 플레이트에 적재한 후 헤어드라이어로 건조합니다.</li><li>플레이트를 20mL 개미산/n-부탄올/물(6:4:1, v:v:v) 용액에 현상하고 헤어드라이어로 건조합니다.</li><li>플레이트를 오르시놀 시약에 담가 염색한 후 헤어드라이어로 말리세요.<ol style='list-style-type:decimal;'><li>오르시놀 시약은 25mL 증류수에 리케놀 900mg을 녹인 후 375mL의 에탄올을 첨가하여 제조합니다. 따라서 농축된 황산을 천천히 첨가하고 용액을 충분히 혼합해야 합니다.</li></ol></li><li>베이킹 오븐에서 120 °C에서 3분간 히트 플레이트를 사용하고, TLC 밴드를 측정하여 EPS 열화를 평가합니다.</li></ol>

<table class='ck-table-resized'><tbody><tr><td>베이킹 오븐</td><td>상하이 이헝 과학 기기 유한회사</td><td>DHG-9240A</td><td>데우고 굽는 데 사용해</td></tr><tr><td>에탄올</td><td>시그마-올드리치</td><td>E7023</td><td>비타민 K1 제제에 사용</td></tr><tr><td>개미산</td><td>시그마-올드리치</td><td>399388</td><td>TLC에 사용됨</td></tr><tr><td>리체놀</td><td>솔라비오</td><td>C8380</td><td>컬러 플레이트 준비에 사용</td></tr><tr><td>n-부타놀</td><td>켐스파이더</td><td>71-36-3</td><td>TLC에 사용됨</td></tr><tr><td>오르시놀</td><td>시그마-올드리치</td><td>447420</td><td>오르시놀 시약을 제조하는 데 사용됩니다</td></tr><tr><td>황산</td><td>시그마-올드리치</td><td>150692</td><td>오르시놀 시약을 제조하는 데 사용됩니다</td></tr><tr><td>TLC 알루미늄 시트</td><td>메르크밀리포어</td><td>116835</td><td>TLC에 사용됨</td></tr></tbody></table>

박테리아 외계다당류 분해를 평가하기 위한 얇은 층 크로마토그래피 수행

Performing Thin-Layer Chromatography to Assess Bacterial Exopolysaccharide Degradation

출처: <a href='https://app.jove.com/v/59725/analysis-interactions-between-endobiotics-human-gut-microbiota-using'>Hu, Y. 외. 시험관 욕조 발효 시스템을 이용한 내생제와 인간 장내 미생물 간 상호작용 분석. J. Vis. 경험 (2019)</a>이 영상은 인간 대변 미생물군에 의한 외계다당류(EPS) 분해를 평가하기 위해 얇은 층 크로마토그래피(TLC)를 사용하는 방법을 시연합니다. 발효 상청액의 EPS 조각은 크기와 극성에 따라 TLC를 사용해 분리한 후, 탄수화물 특이적 염색 후 색이 있는 띠로 시각화됩니다.

Source: Hu, Y., et al. Analysis of Interactions between Endobiotics and Human Gut Microbiota Using In Vitro Bath Fermentation Systems. J. Vis. Exp. ...

https://cloudfront.jove.com/files/ftp_upload/24396/24396_article_thumb_24396.jpg

먼저 분해된 외다당류(EPS)를 포함한 발효 상청액부터 시작하세요.이 EPS는 발효 과정에서 얻어지며, 각 상청액 내 뚜렷한 배설 세균 집단이 EPS에 다르게 작용합니다.극성 고정상으로 미리 코팅된 얇은 층 크로마토그래피 플레이트의 바닥 근처에서 상청액을 발견하세요.판을 자연 건조시킨 후, 고정상보다 극성이 낮은 이동상이 있는 챔버에 넣습니다.이동상이 상승함에 따라 EPS는 극성과 크기에 따라 이동합니다.크고 열화되지 않은 EPS는 고정 상과 강하게 상호작용하며 원점 근처에 머문다.작고 분해된 조각들은 약하게 결합하여 이동상과 함께 위쪽으로 이동합니다.접시를 떼어내고 자연 건조시키세요.플레이트를 EPS와 반응하는 탄수화물 염색 시약에 담가세요.플레이트를 자연 건조시킨 후 가열해서 EPS를 탈수시키고 색 띠를 만듭니다.원점 근처의 단일 밴드는 EPS가 분해되지 않음을 확인하고, 여러 밴드는 박테리아에 의한 EPS 분해를 확인한다.각 미리 코팅된 실리카겔 알루미늄 플레이트 60 TLC 위에 0.2마이크로리터의 발효 상청액을 주입하고 돌려 펴집니다. 그 다음 뜨거운 공기를 이용한 헤어드라이어로 말리세요.샘플링한 플레이트의 한쪽 끝을 20밀리리터의 개상산:n-부탄올:물 용액에 몇 분간 담가 있다가, 전기영동이 거의 반대쪽 끝까지 확장될 때까지 유지합니다. 그 다음 겸자로 플레이트를 빼고 헤어드라이어로 말리세요. 그 후 플레이트를 오르시놀 시약에 2분간 담가 염색 후 다시 건조시킵니다.접시를 120도 오븐에 옮겨 3분간 가열합니다. 그 후 TLC 밴드를 측정하여 EPS 열화를 평가하기 위해 플레이트 사진을 찍으세요.

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Research

연구

JoVE Encyclopedia of Experiments

Microbiology

미생물학

Bacterial Pathogenesis and Host Interactions

세균 병원성 및 숙주 상호작용

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Bacterial Virulence & Biofilms

세균의 독성과 바이오필름

138 조회수. 먼저 분해된 외다당류(EPS)를 포함한 발효 상청액부터 시작하세요.이 EPS는 발효 과정에서 얻어지며, 각 상청액 내 뚜렷한 배설 세균 집단이 EPS에 다르게 작용합니다.극성 고정상으로 미리 코팅된 얇은 층 크로마토그래피 플레이트의 바닥 근처에서 상청액을 발견하세요.판을 자연 건조시킨 후, 고정상보다 극성이 낮은 이동상이 있는 챔버에 넣습니다.이동...

박테리아 외계다당류 분해를 평가하기 위한 얇은 층 크로마토그래피 수행

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이름	회사	카탈로그 번호	댓글
베이킹 오븐	상하이 이헝 과학 기기 유한회사	DHG-9240A	데우고 굽는 데 사용해
에탄올	시그마-올드리치	E7023	비타민 K1 제제에 사용
개미산	시그마-올드리치	399388	TLC에 사용됨
리체놀	솔라비오	C8380	컬러 플레이트 준비에 사용
n-부타놀	켐스파이더	71-36-3	TLC에 사용됨
오르시놀	시그마-올드리치	447420	오르시놀 시약을 제조하는 데 사용됩니다
황산	시그마-올드리치	150692	오르시놀 시약을 제조하는 데 사용됩니다
TLC 알루미늄 시트	메르크밀리포어	116835	TLC에 사용됨