외계다당류에 대한 인간 장내 미생물 활성 조사

초록

출처: Hu, Y. et.al., 시험관 욕조 발효 시스템을 이용한 내도생제와 인간 장내 미생물군 간 상호작용 분석. J. Vis. 경험 (2019)

이 영상은 외계다당류에 반응하여 인간 장내 미생물군이 단쇄 지방산 생성을 분석하는 과정을 보여줍니다. 이 연구는 가스 크로마토그래피를 이용한 미생물 발효물 분리 및 정량화를 강조합니다. 결과는 외다당류가 장내 숙주-병원체 역학에 영향을 미치는 미생물 대사산물을 조절한다는 것을 보여줍니다.

프로토콜

1. 외다당류(EPS)가 인간 장내 미생물군에 의한 단쇄 지방산(SCFA) 생성에 미치는 영향
   1. 5.3단계에서 2mL 원심분리관에서 준비한 발효 상원액(1mL)을 추가합니다.
   2. 각 샘플에 25% (w/v) 메타인산을 0.2mL 첨가하고 용액을 소용돌이로 완전히 혼합합니다.
   3. 혼합물을 13,000 x g에서 20분간 원심분리한 후 상청액을 신선한 튜브로 옮깁니다.
   4. 동시에 120 mM 아세트, 프로피온, 부티르, 아이소부티릭, 발레릭, 이소발레릭산 용액을 준비합니다. 그 다음, 각 준비된 산 1mL를 25% (w/v) 메타인산1.2mL에 첨가하여 표준 칵테일로 사용한다.
   5. 0.22 μM 막을 사용하여 샘플을 여과합니다.
   6. 고성능 가스 크로마토그래피를 이용해 SCFA 농도를 검출합니다.
      참고: 가스 크로마토그래피(GC)에는 InertCap FFAP 컬럼(0.25 mM x 30 m x 0.25 μM)이 사용됩니다. SCFA 농도는 GC 솔루션 소프트웨어 패키지의 단일 점 내부 표준 방법을 사용하여 피크 면적을 기반으로 정량화됩니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
0.22 μm 막 필터	밀리포어	SLGP033RB	샘플을 필터링하는 데 사용
0.4mm 체(체)	서모 피셔	308080-99-1	인간 대변 샘플 준비에 사용됨
아세트	시그마-올드리치	71251	SCFA의 표준 샘플
부티릭	시그마-올드리치	19215	SCFA의 표준 샘플
모세관 기둥	시마즈-GL	비활성 캡 FFAP (0.25 mm × 30 m × 0.25 μm)	SCFA 검출에 사용
가스 크로마토그래피	시마즈 주식회사	GC-2010 플러스	SCFA 검출에 사용
이소부티르	시그마-올드리치	46935-U	SCFA의 표준 샘플
이소발레릭산	시그마-올드리치	129542	SCFA의 표준 샘플
메타인산	시그마-올드리치	B7350	SCFA의 표준 샘플
나오	시그마-올드리치	30620	버퍼 pH를 조절하는 기본 용액
프로피온	시그마-올드리치	94425	SCFA의 표준 샘플
발레릭	시그마-올드리치	75054	SCFA의 표준 샘플