형광 영상을 통한 3차원 박테리아 단백질 분포 시각화

Abstract

출처: Bratton, B. P. 외, 『박테리아 세포의 3차원 영상 정밀 세포 표현과 단백질 위치 파악』. J. Vis. 경험 (2019)

이 영상은 박테리아 세포의 3차원 형광 이미지를 획득하고 분석하여 단일 세포 수준에서 단백질 조직을 연구하는 방법을 시연합니다.

Protocol

1. 영상

1. 밀봉된 슬라이드를 현미경에 삽입하고 주변 온도와 균형을 맞추기 위해 5분간 두세요. 현미경실은 샘플 준비실과 온도가 다를 수 있습니다.
2. 샘플의 형광 Z-스택을 취합니다.
   참고: z-스택은 시추계 깊이보다 작은 z-간격으로 샘플을 완전히 덮어야 합니다. 1.45 NA 100x 대관렌즈와 ~1 μm 두께의 대장균 세포의 경우, 100 nm 간격으로 40단계로 진행하면 효과가 좋습니다. 더 큰 세포나 표면에 완전히 평평하지 않은 세포의 경우, 50단계 이상이 필요할 수 있습니다. 충분한 단계를 포함하고 샘플이 위아래 완전히 흐릿하게 처리되도록 하세요.
   1. 현미경과 연관된 소프트웨어( 재료표 참조)를 사용하여 현미경을 제어하세요.
   2. 현미경 초점 휠을 사용해 세포 중앙에 초점을 맞추세요. ND 획득 항목에서 Z 박스를 체크하여 z-스택을 취하세요. 홈 버튼을 눌러 셀의 중앙을 시작점으로 설정하세요. 스텝 크기를 0.1 μm으로 설정하고 범위는 4 μm으로 설정하세요. Z 장치가 압전 단계로 설정되어 있는지 확인하세요.
   3. 람다 창 아래 형광 채널을 영상 중인 형광 분자 설정으로 설정하세요. 이....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
아가로스	시그마-올드리치	A9539
면봉	퓨리탄 메디컬 프로덕츠 컴퍼니 LLC	S304659	VaLaP를 Appy 사용했습니다
표지 슬립	VWR	16004-302
피지	이미지J	https://fiji.sc	크로셀에 사용됨
라놀린	시그마-올드리치	L7387	파라핀과 바셀린젤과 결합해 VaLaP를 만듭니다
LB 성장 배지	BD 디프코	DF0446173
M63 중형	미국 생물학	M1015
MATLAB	수학 작품		컨볼루션 스크립트를 앞으로 실행해야 합니다
현미경 슬라이드	피셔	12-550-133
NIS 요소	은콘
파라핀	시그마-올드리치	327212
바셀린	이퀄트	49035-038-27
피에조 z 단계	니콘	77011589
피펫 팁 -p200	USA 사이언티픽	1111-0730
피펫 팁 - p10	USA 사이언티픽	1111-3730