세균 노출 후 C. elegans 의 장 투과성 평가

초록

출처: Le, T. A. N . 외, 박테리아 및 화학물질이 카 에노르하브디티스 엘레간스의 장 투과성에 미치는 영향 측정. J. Vis. 경험 (2019)

이 영상은 Pseudomonas aeruginosa에 노출된 C. elegans의 장 투과성을 정량화하기 위한 형광 기반 분석 방식을 보여줍니다. 대장균을 먹인 대조군과 비교하면, 병원체 처리된 벌레는 체강으로의 형광체 누출이 증가하여 상피 장벽 손상을 나타냅니다.

프로토콜

1. 선충 성장 배지(NGM) 플레이트 제작, 다양한 박테리아가 Caenorhabditis elegans(C. elegans)의 장 투과성에 미치는 영향을 시험하기 위해

1. 500mL 유리병에 펩톤 1.25g, NaCl 1.5g, 한천 8.5g, 자기 교반기, 증류수 487.5mL를 넣습니다.
2. 혼합물을 잘 섞고, 121 °C에서 15분간 오토클레이브한 뒤, 55 °C로 물욕에서 30분간 식힙니다.
3. 배지를 수욕에서 꺼내고, 각 성분들(1 M CaCl₂ 0.5 mL, 콜레스테롤 0.5 mL, MgSO₄ 0.5 mL, KPO₄ 12.5 mL)을 NGM에 넣고 잘 섞습니다.
   참고: 콜레스테롤(절대 에탄올에 용해됨)을 제외한 모든 개별 성분은 오토클레이션되어야 하며, 모든 실험 단계는 깨끗한 작업대에서 수행되어야 합니다.
4. 각 90 x 15mm 양양 접시에 20mL의 NGM을 분포하고, 한천을 상온(약 20°C)에서 깨끗한 작업대에서 굳히도록 합니다. NGM 플레이트는 4°C에서 최대 한 달간 보관할 수 있습니다.
   참....

결과

그림 1: C. elegans의 장 투과성에 미치는 다양한 박테리아의 영향. 밝은 영역, FITC 형광(녹색 채널), 병합 이미지를 포함한 벌레의 현미경 이미지. FITC-덱스트란 섭취 없이 섭취한 (A) 대장균 OP50, (B) FITC-덱스트란 섭취를 한 대장균, (C.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
90×15mm 페트리 접시	SPL 라이프 사이언스, 대한민국	10090
60×15 mm 페트리 접시	SPL 라이프 사이언스, 대한민국	10060
박터 아가르	벡턴 딕킨슨	참고 문헌 214010
포름알데히드 용액	시그마	F1635
뇌 심장 주입술(BHI)	벡턴 디킨슨	참고문헌 237500
카에노르합디티스 엘레간스 N2	카에노랍디티스 유전학 센터(CGC)		야생형
코스타 검사 플레이트, 96 웰 블랙, 투명하고 평평한 바닥, 처리되지 않은 폴리스티렌	코닝 주식회사	참고문헌 3631
대장균 OP50	카에노랍디티스 유전학 센터(CGC)
플루오레세인 이소티오시아네이트 - 덱스트란	시그마	FD10
하모니 소프트웨어	퍼킨엘머		버슨 3.5
루리아-베르타니 LB 미디엄	머크	VM743185 626 1.10285.5000
황산마그네슘 헵타하이드레이트	피셔 바이오리에이전트	BP2213-1
플루오로마운트 수성 마운팅 배지	시그마	F4680
오페레타 CLS 고콘텐츠 분석 시스템	퍼킨엘머	HH16000000
펩톤	머크	EMD 1.07213.1000
Pseudomonas aeruginosa(슈도모나스 아에루기노사) PA01	서체 문화를 위한 한국 컬렉션	KCTC 번호 1637
염화나트륨	피셔 바이오리에이전트	BP358-1
입체 현미경	니콘, 일본	SMZ800N
효모 추출물	벡턴 디킨슨	참고문헌 212750