쥐의 반복성 요로 감염을 모델링하기 위한 Gardnerella vaginalis 접종 제제

초록

출처: 오브라이언, V.P. 외 가드네렐라 진공 방광 노출로 유발된 재발성 대장균 요로 감염. J. Vis. 경험 (2020)

이 영상은 반복성 요로 감염의 마우스 모델을 구축하기 위해 Gardnerella vaginalis 접종체를 준비하는 과정을 보여줍니다.

프로토콜

1. 가드네렐라 질성 접종을 준비하세요
   참고: 모든 단계는 혐기성 챔버에서 수행됩니다. 이상적인 배양 배양 시간은 G . vaginalis의 다양한 균주에 따라 다르며, 어떤 균주는 정지기에 들어가거나 더 빨리 죽기 시작합니다. 따라서 쥐 실험을 수행하기 전에 특정 균주에 대해 경험적으로 배양 시간을 결정해야 합니다. 이 모델에서 모든 G. vaginalis 의 다른 또는 모든 균주가 동일한 효과를 유발할지는 알려지지 않았습니다.
2. -80°C 냉동용 줄기 균주를 NYCIII 플레이트(항생제 없이)로 스트릭 G . vaginalis . 37°C에서 혐기성 배양 상태로 24시간 배양합니다.
3. 혐기성 챔버에서 혐기성 NYCIII 배지를 5mL에 1 μL 루프 분량의 세포(단일 콜로니는 부족함)와 함께 접종하고, 37°C에서 혐기성 조건에서 18시간 동안 정적 배양합니다. 배지에 항생제를 포함하지 마세요.
4. 분광광도계를 사용하여 배양액의 OD⁶⁰⁰ 을 측정합니다
   1. 정해진 양(X)을 9600 × g에서 1분간 원심분리한 후 배지를 흡입합니다. 다음 식으로 펠릿을 재현탁하여 50 μL 내에서 10⁸ 콜로니 형성 단위(CFU)를 달성하기 위해 환산 광밀도(OD)를 달성하기 위한 인산 완충 생리식염수(PBS) 부피(Y)를 계산합니다: X mL × OD배양 = Y mL × OD 접^종, YY = (X ml × OD배양) / OD ^접종량을 구합니다
      참고: JCP8151B^SmR의 OD ^접종량은 5이지만, 다른 G. vaginalis균주에 대해서는 경험적으로 이를 결정해야 합니다. 예를 들어, ODculture = 2.0의 JCP8151B^SmR 액체 배양액 3mL를 하룻밤 동안 방적할 경우: Y= (3 mL × 2.0) / 5.0; 따라서 펠릿을 1.2 mL PBS에 재현탁합니다.
   2. 박테리아 펠릿을 PBS에 원하는 농도로 재현탁합니다. 접종을 연속적으로 희석하고 도판하여 각 실험에서 실제로 사용된 접종량을 결정합니다. 외측값에만 의존하지 마세요.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
포도당	시그마	G7528	NYCIII G . 질 성 성장 매개체에 대해
4-(2-하이드록시에틸)-1-피페라지네에탄설폰산(HEPES)	셀그로	25-060-CL	NYCIII G . 질 성 성장 매개체에 대해
염화나트륨	시그마	S3014	NYCIII G . 질 성 성장 매개체에 대해
프로테오스 펩톤 #3	피셔	DF-122-17-4	NYCIII G . 질 성 성장 매개체에 대해
효모 추출물	피셔	DF0127-17-9	NYCIII G . 질 성 성장 매개체에 대해
분광광도계	바이오크롬	80-3000-45	박테리아 OD600 측정
스트렙토마이신	깁코	11860038	G. vaginalis NYCIII 선택판 추가(1 mg/mL)