바이러스 공동 감염 후 폐렴구 균 의 병원성 전이를 연구하기 위한 마우스 모델

초록

출처: Lenhard, A. 외. 바이러스 공동 감염 시 폐 렴 구균이 집착자에서 병원체로 전환되는 마우스 모델은 연령에 따른 악화된 질병을 재현합니다. J. Vis. 경험 (2022)

이 영상은 인플루엔자 바이러스가 폐 렴구 균을 정착자에서 병원체로 전환시키는 쥐 공동 감염 모델을 보여줍니다. 박테리아 정착, 바이러스 감염, 질병 진행에 관련된 단계를 개괄합니다.

프로토콜

동물 모델이 포함된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 심사 위원회에서 검토되었습니다.

1. 생체 필름으로 배양된 Streptococcus pneumoniae(S. pneumoniae)로 생쥐의 비강 내 접종

1. 마우스를 구입해서 원하는 나이에 사용하세요.
   참고: 3-4개월 된 쥐가 젊은 숙주 모델링에 선호되며, 21-24개월 생쥐는 65세 노인을 모델링하는 데 사용할 수 있습니다>. 여기 제시된 데이터는 C57BL/6 수컷 쥐에서 가져온 것입니다.
2. 바이오필름으로 배양된 박테리아 알리코트를 얼음 위에 녹이고 1,700 × g에서 5 분간 돌 립니다. 펠릿을 손상시키지 않고 상청액을 조심스럽게 제거하고 버리고, 박테리아를 1 mL의 인산 완충 생리식염수(PBS)에 재현탁하여 세척한 후 1,700 × g 에서 5분간 다시 돌립니다. 상원액을 제거하고 펠릿을 원하는 농도에 도달하는 데 필요한 부피로 재현탁하세요(비강 주사 시 5 ×¹⁰ 10 6 콜로니 형성 단위(CFU)/10 μL 기준). 준비된 접종물을 혈액 한천 플레이트에 도판하여 투여한 박테리아 양을 확인하세요.
3. 희석된 접종액 5 μL을 각 naris에 피펫팅하여 5 × 10⁶ CFU를 비강 내에 접종합니다. 마우스를 단단히 잡고 머리를 안정시키며, 볼륨을 흡입할 때까지(보통 볼륨을 네어에 넣은 지 몇 초 이내에) 꼭 잡아주세요. 마취가 없는 상태에서 이 과정을 수행하여 폐 흡인을 예방하세요.

2. 인플루엔자 A 바이러스(IAV)에 의한 바이러스 감염

1. S . pneumoniae 비강 주사 후 48시간쯤 얼음 위에서 관심 있는 IAV 균주를 해동합니다.
   참고: 여기 제시된 데이터는 협력 교환 을 통해 얻은 쥐 적응형 인플루엔자 A 바이러스 A/PR/8/34 H1N1 균주입니다.
2. 바이러스가 해동되면, PBS로 희석하여 원하는 농도로 만듭니다; 기관내 감염에는 20 플라크 형성 단위(PFU)/50 μL, 비강 내 감염에는 200 PFU/10 μL 권장 용량을 목표로 합니다. 모조 감염 및 박테리아 단독 그룹의 경우, PBS를 사용해 마우스에 접종을 합니다.
3. 마취 전에 쥐의 눈에 안과 윤활제를 바르세요. 쥐를 5% 이소플루란으로 마취시키고, 단단한 발가락 꼬집기로 마취를 확인하세요.
4. 마취 후 이소플루란 챔버에서 꺼내고, 즉시 50 μL(20 PFU) IAV를 기관내에서 둔한 핀셋으로 혀를 빼내고 피펫으로 액체를 기관 아래로 투여합니다.
5. 쥐들을 별도의 우리에 넣고 완전한 회복 시점까지 관찰하세요(흉골 누워 있을 수 있는 흉골 누워 있을 수 있음).
6. 회복 후 즉시 1.3단계의 예방접종 방법으로 10 μL(200 PFU)의 IAV를 비강 내 투여합니다.
7. 같은 감염군에서 단일 또는 이중 박테리아 및 바이러스 감염을 겪고 다른 그룹과 분리된 집쥐들.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
4-아미노벤조산	피셔	AAA1267318	믹스 I 재고
100 μm 필터	피셔	07-201-432
BD 인트라메딕 폴리에틸렌 튜빙	피셔	427410	비강 세척용 튜빙
BD 일회용 주사기, 루어록 팁 (1 mL)	피셔	14-823-30
D39	국가 유형 문화 컬렉션(NCTC)	NCTC 7466	폐렴구균 균주
피베탈 이소플루란	패터슨 수의원	07-893-8440	감염 중 마취를 위한 이소플루란
Thermo Scientific 혈액 아천과 겐타미신	피셔	R01227	항생제 겐타마이신이 들어간 혈액 한천 플레이트
TIGR4	ATCC	BAA-334	폐렴구균 균주