$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
동물 모델이 포함된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 심사 위원회에서 검토되었습니다.
1. 생체 필름으로 배양된 Streptococcus pneumoniae(S. pneumoniae)로 생쥐의 비강 내 접종
- 마우스를 구입해서 원하는 나이에 사용하세요.
참고: 3-4개월 된 쥐가 젊은 숙주 모델링에 선호되며, 21-24개월 생쥐는 65세 노인을 모델링하는 데 사용할 수 있습니다>. 여기 제시된 데이터는 C57BL/6 수컷 쥐에서 가져온 것입니다. - 바이오필름으로 배양된 박테리아 알리코트를 얼음 위에 녹이고 1,700 × g에서 5 분간 돌 립니다. 펠릿을 손상시키지 않고 상청액을 조심스럽게 제거하고 버리고, 박테리아를 1 mL의 인산 완충 생리식염수(PBS)에 재현탁하여 세척한 후 1,700 × g 에서 5분간 다시 돌립니다. 상원액을 제거하고 펠릿을 원하는 농도에 도달하는 데 필요한 부피로 재현탁하세요(비강 주사 시 5 ×10 10 6 콜로니 형성 단위(CFU)/10 μL 기준). 준비된 접종물을 혈액 한천 플레이트에 도판하여 투여한 박테리아 양을 확인하세요.
- 희석된 접종액 5 μL을 각 naris에 피펫팅하여 5 × 106 CFU를 비강 내에 접종합니다. 마우스를 단단히 잡고 머리를 안정시키며, 볼륨을 흡입할 때까지(보통 볼륨을 네어에 넣은 지 몇 초 이내에) 꼭 잡아주세요. 마취가 없는 상태에서 이 과정을 수행하여 폐 흡인을 예방하세요.
2. 인플루엔자 A 바이러스(IAV)에 의한 바이러스 감염
- S . pneumoniae 비강 주사 후 48시간쯤 얼음 위에서 관심 있는 IAV 균주를 해동합니다.
참고: 여기 제시된 데이터는 협력 교환 을 통해 얻은 쥐 적응형 인플루엔자 A 바이러스 A/PR/8/34 H1N1 균주입니다. - 바이러스가 해동되면, PBS로 희석하여 원하는 농도로 만듭니다; 기관내 감염에는 20 플라크 형성 단위(PFU)/50 μL, 비강 내 감염에는 200 PFU/10 μL 권장 용량을 목표로 합니다. 모조 감염 및 박테리아 단독 그룹의 경우, PBS를 사용해 마우스에 접종을 합니다.
- 마취 전에 쥐의 눈에 안과 윤활제를 바르세요. 쥐를 5% 이소플루란으로 마취시키고, 단단한 발가락 꼬집기로 마취를 확인하세요.
- 마취 후 이소플루란 챔버에서 꺼내고, 즉시 50 μL(20 PFU) IAV를 기관내에서 둔한 핀셋으로 혀를 빼내고 피펫으로 액체를 기관 아래로 투여합니다.
- 쥐들을 별도의 우리에 넣고 완전한 회복 시점까지 관찰하세요(흉골 누워 있을 수 있는 흉골 누워 있을 수 있음).
- 회복 후 즉시 1.3단계의 예방접종 방법으로 10 μL(200 PFU)의 IAV를 비강 내 투여합니다.
- 같은 감염군에서 단일 또는 이중 박테리아 및 바이러스 감염을 겪고 다른 그룹과 분리된 집쥐들.