질 그룹 B 연쇄상구균 감염의 마우스 모델 구축

초록

출처: 파트라스, K. A., 도란, K. S. B 군 연쇄상구균 질 정착의 쥐 모델. J. Vis. 경험 (2016)

이 영상은 B 그룹연상구균 에 감염된 호르몬 처리된 암컷 쥐의 준비 및 질 접종 과정을 시연하여 감염을 모델링합니다. 박테리아를 배양하고 준비하는 방법, 질 내강에 접종을 투여하는 방법, 그리고 성공적인 감염을 보장하는 방법을 설명합니다.

프로토콜

동물 모델이 포함된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 심사 위원회에서 검토되었습니다.

1. 그룹 B 연쇄상구균(GBS) 질 접종

1. 접종 하루 전, 관심 있는 GBS 균주(예: A909(혈청형 Ia)를 37°C에서 Todd Hewitt 육수(THB)에 5ml 액체 배양을 배양합니다.
2. GBS를 1:10 부피로 하룻밤 배양하여 신선한 THB에 넣고 37°C에서 배양합니다. 박테리아를 중간 로그 단계(OD₆₀₀ = 0.4-0.5)까지 배양합니다.

참고: 이 과정은 GBS 균주에 따라 보통 2시간에서 3시간 정도 걸립니다.

3. 아브컬처를 멸균된 15ml 원뿔 튜브에 옮기고 3,000 × g에서 5분간 박테리아를 펠릿으로 옮깁니다. 상정액을 흡인하세요. 박테리아 펠릿을 200μl 무균 인산염 완충식염수(PBS)에 재현탁합니다.
4. 재현탁된 펠릿을 사용해 3-5 ml의 PBS(쥐 10마리당 1ml)를 새로운 5ml 배양관에 정확히 OD₆₀₀ = 0.4까지 가져갑니다. 농도는 ~ 1 ×^{10 8} 콜로니 형성 단위(CFU)/ml가 됩니다. 새 15ml 원뿔형 튜브로 옮기고 3,000 × g에서 박테리아를 5분간 다시 펠릿으로 투여합니다. 상정액을 흡인하세요.
5. 펠릿을 원래 부피의 1/10 크기로 PBS에 다시 현탁하세요. 예를 들어, OD₆₀₀ = 0.4 3ml를 펠릿으로 만들었다면, 이를 300μl의 PBS에 재현탁합니다.

참고: 이것이 동물 접종에 사용되는 마지막 박테리아 현탁액(~ 1 ×^{10 9} CFU/ml)입니다.

6. 이 현탁액 50μl를 THB 한천에 연속 희석 및 도금을 위해 저장하여 정확한 접종량을 결정합니다.
7. 각 마우스에게 최종 박테리아 현탁액 10 μl을 접종하여 각 마우스에게 1 × 10^{7 CFU} 를 투여합니다.
   1. 예방접종을 위해서는 조련사의 엄지와 검지 사이에 목덜미의 느슨한 피부를 고정한 뒤 꼬리를 고정시켜 수동으로 제지합니다.
   2. GBS 10 μl을 200μl 겔 로딩 피펫 팁에 빨아들입니다. 팁을 5에서 10mm 정도 질 내강에 삽입하고 10μl 접종제를 투여합니다.
      참고: 젤 로딩 팁은 특히 어린 쥐나 작은 쥐에서 장기 외상이나 손상 위험을 최소화하기 위해 표준 200μl 팁보다 선호됩니다.
   3. 접종 직후에는 목덜미를 풀고 쥐의 뒷부분을 들어 올리며, 꼬리를 잡아 들어 올린 뒤 앞발로 단단한 표면 위를 ~ ~ 1분간 걷게 하세요.
   4. 질 입구를 시각적으로 확인해 접종 유입이 있는지 확인하세요. 역류가 관찰되면 새 피펫 팁을 사용해 질 입구를 조작하거나 확장하여 역류가 내강으로 흡수되도록 돕습니다. 또한, 역류는 피펫을 통해 흡입하여 재접종할 수 있습니다.
      참고: 국소 약물, 프로바이오틱 생물 또는 관심 단백질을 투여할 경우, 질 내에 최대 20 μl의 생리학적 완충제를 투여할 수 있습니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
200 μl 겔 로딩 피펫 팁	USA 사이언티픽	1252-0610
토드 휴잇 브로스	하디 다이그노스틱스	7161C
둘벡코의 인산염 완충염 용액 1회	코닝	21-031-CV