면봉 및 염색 배양을 통한 마우스 질 내강 내 그룹 B 연쇄상구균 부하 정량화

초록

출처: 파트라스, K. A. & 도란, K. S. B 군 연쇄상구균 질 정착의 쥐 모델. J. Vis. 경험 (2016)

이 영상은 면봉 채취와 염색 배양을 이용해 마우스 모델에서 질 B 군 연쇄상구균 (GBS) 부하를 정량화하는 과정을 보여줍니다. 이 연구는 마우스 질 내강 내 GBS 부하를 정량화하기 위해 샘플 수집, 플레이트 부착, 콜로니 카운팅 과정에 필요한 단계를 개괄합니다.

프로토콜

동물 모델이 포함된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 심사 위원회에서 검토되었습니다.

1. 질 내강을 면봉으로 채취하여 GBS 부하를 정량화하기

1. 쥐당 100μl의 인산염 완충 생리식염수(PBS)를 추가하여 1.5ml 마이크로 원심분리관 1개를 준비합니다. 면봉 채취 직전에 PBS에서 면봉을 미리 적셔 주세요.
2. 쥐를 제지하고 면봉을 질 내강에 10mm 삽입하세요. 면봉을 시계 방향으로 4회, 반시계 방향으로 4번 부드럽게 돌리면서 질 벽에 약간의 압력을 가하세요.
3. 면봉을 100 μl PBS와 함께 1.5ml 마이크로 원심분리관으로 옮깁니다. 도금 전에 마이크로 원심분리기 튜브를 약 15초 정도 소용돌이로 돌려 면봉에서 박테리아를 방출합니다. 각 샘플을 PBS로 연속적으로 희석하고, 제조사 지침에 따라 조제된 차등 중형 한천 플레이트에 1:10에서 1:10,000 비율의 희석액 20μl을 배판합니다. 판을 37°C에서 24시간 배양하세요. 그룹 B 연쇄상구균 (GBS) 군집은 밝은 분홍색 또는 연보라색을 띱니다. 다른 내인성 식물상은 억제되거나 파란색, 흰색, 회색 군집으로 나타납니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
요도-생식기, 멸균, 알지네이트 칼슘 면봉	청교도	25-801 A 50
크로마가 연쇄상선(CHROMagar StrepB)	DRG 인터내셔널	SB282
둘벡코의 인산염 완충염 용액 1회	코닝	21-031-CV