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1. A. baumannii S1의 바이오필름 형성에 대한 결정 자비 정량
- 5mL 양의 아시네토박터 바우만니 S1(A. baumannii) 배양물을 라이소제니 육수(LB)(트립톤 10 g/L, 효모 추출물 5 g/L)를 30°C에서 진동 인큐베이터(220 rpm)에서 16시간 동안 배양합니다.
- A. baumannii S1의 배양을 600 nm(OD₆₀₀)에서 원하는 광학 밀도 0.8로 조정합니다. 96웰 플레이트를 사용해 박테리아 배양(1:100 희석)을 10 μl의 정제된 GKL 효소(40 mg/ml)가 포함된 신선한 LB에 접종합니다; 새로운 배양의 최종 용량은 100 μl입니다.
- 대조군 배양도 준비하세요; 이 과정에는 효소가 들어있지 않습니다. 원하는 복제 수를 얻기 위해 유사한 조건을 반복합니다.
- 접시를 뚜껑으로 덮고 밀봉된 10L 플라스틱 용기에 넣으세요. 플레이트를 30°C에서 3시간 배양한 후 배지를 부드럽게 제거하세요.
- 웰에 신선한 LB 배지 100μl을 추가하고 30°C에서 21시간 배양합니다.
- 두 번째 배양 기간이 끝난 후에는 모든 배지를 부드럽게 제거하세요. 플랑크톤 박테리아 세포를 200μl 멸균수로 세척하세요. 세척 시 세포에 미치는 손상이 최소화되도록 하세요.
- 각 웰에 1% 크리스탈 바이올렛 용액 100μl을 추가하고 상온에서 15분간 배양합니다. 200μl 멸균수로 우물을 세척하여 결정 보라색 용액을 제거합니다. 세척을 두 번 더 반복하세요.
- 각 웰에 33% 아세트산 100μl 부드럽게 흔들며 15분간 배양합니다; 이걸로 염료가 녹아버릴 거야.
- 600nm에서 결정 바이올렛의 흡광도를 측정하여 형성되는 바이오필름의 양을 정량화합니다. 결정 바이올렛의 양은 형성되는 바이오필름의 양에 비례합니다.