마우스 모델에서의 카테터 관련 요로 감염

초록

출처: Conover, M. S. 외, J. 쥐 모델에서 요로감염 및 CAUTI의 확립 및 특성화. J. Vis. 경험 (2015)

이 영상은 암컷 쥐에 경요도 카테터를 조립하고 이식한 후 박테리아 접종을 통해 카테터 관련 요로 감염을 확립하고 바이오필름 매개 숙주-병원체 상호작용을 조사하는 절차를 시연합니다.

프로토콜

동물 모델이 포함된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 심사 위원회에서 검토되었습니다.

1. CAUTI(카테터 관련 요로 감염) 모델 프로토콜, CAUTI 모델을 위한 카테터 바늘 준비

1. 30G 바늘 뚜껑을 제거하세요. 7mm 길이의 PE10(폴리에틸렌 10) 튜브와 5mm 길이의 실리콘 튜브(예: RenaSIL)를 자르세요. 바늘에 PE10 튜브를 꿰아 튜브가 바늘 밑부분에 닿게 하세요.
2. 그 다음 5mm 조각을 PE10이 들어간 바늘에 넣습니다. 자외선(UV)으로 밤새 바늘 조립체를 멸균합니다.
   참고: 실리콘 튜브를 장전할 때는 바늘 끝을 넘어 약 1mm 정도 튜브를 남겨두세요.

2. E. faecalis OG1RF 박테리아 접종 제제

1. 접종일 48시간 전부터 OG1RF 접종을 준비하세요. 냉동 육수에서 BHI(뇌심장 주입) 플레이트에 OG1RF를 스트릭 처리합니다.
2. 군집을 하나 골라 10ml BHI에 접종한 후 37°C에서 18시간 동안 정적으로 배양합니다. 배양물을 원심분리하여 1ml 무균 1x PBS에 3회 세척합니다.
3. 박테리아 펠릿을 1x PBS(인산 완충 식염수)에 재현탁합니다. 박테리아의 광학 밀도를 측정하고 원하는 접종 크기에 맞게 농도를 조정합니다. 사용되는 접종액의 표준 농도는 10⁷이며; 하지만 연구 설계에 따라 달라질 수 있습니다

3. 카테터 이식

1. 작업대를 70% 에탄올로 청소하고 흡수 커버로 덮거나(또는 멸균 유동 후드를 사용하세요)
2. 빈 1ml(결핵 또는 투베르쿨린) 주사기에 카테터 바늘을 연결하세요. 1인치 정사각형 파라필름 조각을 잘라내고 그 위에 수술용 윤활제(대략 10센트 크기 정도)를 조금 뿌립니다.
   참고: 카테터 삽입과 접종 삽입에는 두 가지 다른 바늘이 사용되어, 카테터 이식에 필요한 기계적 조작으로 인한 우발적 접종을 최소화합니다. 이로 인해 접종 주사기를 적게 준비할 수 있는 편리함도 생깁니다.
3. C57BL/6 쥐는 32온스 유리병에 티퓨저 볼과 면볼, 3ml 이소플루란에 적신 솜 또는 증기 챔버(제조사 프로토콜에 따라 )에 넣어 의식을 잃었지만 정상적으로 호흡할 때까지 마취하세요(초당 1호흡).
4. 그 다음 쥐를 종이 타월 위에 눕히고 다리를 벌리세요. 코를 코 콘이나 50ml 원뿔형 튜브에 소량(약 1-2ml)의 이소량 이소플루란이 담긴 솜으로 덮어주세요.
   주의: 이소플루란은 흡입 마취제입니다. 통풍이 잘 되는 곳에서 사용하고, 연구자가 흡입을 최소화하세요.
5. 방광을 부드럽게 촉진하여 소변을 유도하고 방광이 배출되도록 하세요. 요도 주변 부위를 100% 에탄올 물티슈로 닦으세요.
6. 요도 주변 부위를 10% 포비돈-요오드 용액으로 면끝 어플리케이터를 사용해 소독하세요. 접종 바늘/주사기를 먼저 수술용 윤활제에 살짝 찍어 넣으세요.
   참고: 포비돈-요오드는 카테터 삽입에 사용되며, 알코올보다 더 강한 무균 용액입니다. 카테터 이식은 카테터를 삽입하기 위해 더 많은 기계적 조작이 필요하므로 오염 가능성이 더 큽니다.
7. 카테터를 요도 입구에 삽입하세요. 삽입 후에는 핀셋으로 (7mm PE10) 긴 조각을 방광 쪽으로 밀어 넣고, 그 결과 (5mm 실리콘) 작은 카테터를 밀어 방광 안으로 삽입합니다. 바늘을 7mm 튜브가 연결된 상태로 즉시 제거하세요.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
카테터 및 바늘 준비를 위한 재료:
30G 바늘	BD 프리시전 글라이드	305106	30 G x 1/2 (0.3 mm x 13 mm)
PE10 폴리에틸렌 튜빙	BD	427400	내경은 -0.011인치(0.28mm); 외경 – 0.024인치 (0.61 mm)
RenaSIL 025 백금 경화 실리콘 튜빙	브레인트리 사이언티픽 주식회사	시누이 025	내부 직경 - 0.012 x 외경 0.025, 25피트 코일
감염 물질:
이소플루루란 – 등각(isothesia)	버틀러 샤인	29405	250ml
투명 유리 직선 병	킴블 체이스	5413289V 21
스테인리스 스틸 티 인퓨저	셰프스-아마존		Schefs 프리미엄 잎차 인퓨저 - 스테인리스 스틸 - 대용량 -
비멸균 면뭉치	피셔브랜드	22-456-880
50ml 팔콘 튜브	VWR	89039-660
Isotec 3 - 증발기	오메다	1224478
귀 펀치	피셔 사이언티브	13-812-201	(필요할 때)
베타딘 용액	베타딘 용액		10% 포비디-요오드 국소용액
면봉	피셔 사이언티브	22-037-924	6인치
벤치용 기저귀	피셔브랜드	14206 63	흡수 언더패드 (20"x36"매트)
수술용 윤활제	서길루브	0281-0205-36
해부 가위	파인 사이언스 툴스, INC	14084-08
마이크로 애드손 겸자	파인 사이언스 툴스, INC	11018-12
1ml 주사기	BD	309659	투버쿨린 슬립 팁
파라필름	베미스	PM996	4인치 x 125피트
에펜도르프 선반	피셔브랜드	05-541-1
에펜도르프 진공관	중산과학	AVX-T-17-C
카테터, 방광 및 신장 채취:
균질기	프로 사이언티픽 INC	바이오젠 프로 200
5ml 폴리프로필렌 둥근 바닥 튜브	BD	352063	장기 균질화를 위해
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