병원성 박테리아를 이용한 화상 감염의 마우스 모델 구축

초록

출처: 왕, Y. 외. 생체 내 생물발광 영상을 이용한 다약물 내성 아시네토박터 바우만니 화상 감염에 대한 항균 청색광 치료 연구. J. Vis. 경험 (2017)

이 영상은 가열한 황동 블록을 적용한 후 병원성 박테리아 접종을 투여하여 쥐 모델에서 화상 감염을 확립하는 방법을 시연합니다. 박테리아는 노출된 세포외 기질에 정착하여 바이오필름을 형성하여 숙주-병원체 상호작용의 생체 내 연구를 가능하게 합니다.

프로토콜

동물 모델이 포함된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 심사 위원회에서 검토되었습니다.

1. 생물발광 아시네토박터 바우만니에 의한 화상 감염의 마우스 모델

1. 7-8주 된 성체 암컷 BALB/c 마우스를 사용하고, 몸무게는 17-19g입니다. 실험 시작 최소 3일 전까지는 쥐들이 실험실 환경에 적응할 시간을 두세요. 쥐들을 21°C 실온에서 12시간 동안 밝고 어두운 주기로 유지하고, 자유롭게 먹이와 물을 주세요.
2. 케타민-자일라진 혼합 요법(100 mg/kg-20 mg/kg)을 복강내 주사로 쥐를 마취합니다. 각 쥐의 팔페브라를 면봉으로 가볍게 만지세요; 백 반사가 없다면 적절한 마취 깊이를 시사합니다. 마취 중 눈이 건조해지는 것을 막기 위해 수의사용 연고로 덮어주세요.
3. 50번 머리 깎기를 사용해 등 뒤의 마우스를 면도해 최대한 피부를 노출시키세요.
4. 35mm 페트리 접시 뚜껑을 각 쥐의 배 아래에 올려 등을 비교적 수평으로 유지하세요.
5. 250mL 비커(80% 가득 찬)에서 10" x 10", 220볼트 교류(VAC) 핫플레이트를 사용해 물을 끓입니다. 황동 블록(단면이 1cm x 1cm)을 비커에 담가, 물과 열평형이 될 때까지 사용하세요. 열평형은 보통 <5분이 걸리며, 비커 내 물이 다시 끓는 것으로 표시됩니다.
6. 화상 부상을 만들기 전에 통증 완화를 위해 선제 진통제(0.1 mg/kg 부프레노르핀 피하 주사)를 투여하세요.
7. 선제적 진통제 투여 후 10분 후, 가열한 황동 블록을 쥐 등 쪽 면도된 부위에 7초간 부드럽게 눌러 화상 상처를 유도합니다.
   참고: 작업 중인 인력의 열 손상을 방지하기 위해 소각 작업 시 내열 장갑을 착용하세요.
8. 탈수를 방지하기 위해 피하 주사를 통해 멸균 생리식염수 0.5mL를 투여하세요.
9. 열 손상이 유발된 지 5분 후, 5개의 10⁶ 콜로니 형성 단위(CFU)를 포함한 50 μL 박테리아 현탁액을 인산염 완충식염수(PBS)에 피펫으로 쥐 화상에 접종합니다. 그 후 멸균 면봉을 지그재그 방향으로 피부에 바르고, 화상 부위에 알리코트를 바르어 화상 부위의 박테리아 세포가 최대한 고르게 분포되도록 합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
마우스	찰스 리버 연구소, 윌밍턴, 매사추세츠	BALB/c	7-8주 생후, 17-19g 체중
아시네토박터 바우만니	텍사스 포트 샘 휴스턴의 브룩 육군 의료 센터	임상 분리	인공 발광 변형
인슐린 주사기	피셔 사이언티브	14-826-79	BD 저용량 U-100 인슐린 주사기 주사기
염화나트륨	피셔 사이언티브	721016	염화나트륨 0.9%
인산 완충 식염수, 1x 용액	피셔 사이언티브	BP24384	많은 생체분자 절차에서 사용되는 표준 인산 완충제
접종 루프	피셔 사이언티브	22-363-605	쥐의 화상 표면에 박테리아 이노클럼을 바르기 위해
황동 블록	스몰 파츠, Inc., 마이애미, 플로리다	10 mm x 10 mm	쥐에서 화상 발생을 위해
익스트림 드래곤 PBI/케블라 고열 장갑	슈피리어 글러브 웍스 주식회사, 치크토와가, 뉴욕	PBI83514	내열 장갑
그라이너 요리	시그마-올드리치 주식회사	P5112-740EA	35 mm ×10 mm
코닝 디지털 핫플레이트	콜-파머 인스트루먼트 컴퍼니, LLC	UX-84301-65	10" x 10", 220 VAC, 끓는 물용
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