쥐의 아시네토박터 바우만니 감염 화상 상처의 생물발광 영상

초록

출처: 왕, Y. 외. 생체 내 생물발광 영상을 이용한 다약물 내성 아시네토박터 바우만니 화상 감염에 대한 항균 청색광 치료 연구. J. Vis. 경험 (2017)

이 영상은 생물발광 오페론을 가진 아시네토박터 바우만니 에 접종된 쥐에서 화상 상처 감염을 영상화하는 절차를 시연합니다. 루시퍼레이스 촉매 기질 산화가 박테리아 부하에 비례하는 빛을 생성하여, 생물발광 영상 시스템을 이용해 감염 진행을 실시간으로 모니터링할 수 있음을 보여줍니다.

프로토콜

동물 모델이 포함된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 심사 위원회에서 검토되었습니다.

1. 쥐 감염의 생물발광 영상

1. 저조도 영상 시스템을 사용하여 쥐를 촬영하는데, 이 시스템은 강화된 전하 결합 장치 카메라, 카메라 컨트롤러, 시료실, 이미지 프로세서를 포함합니다.
2. 케타민-자일라진 혼합 제도를 복강 내 주사(100 mg/kg - 20 mg/kg)로 마취합니다. 면봉으로 쥐의 손을 가볍게 만지세요; 백 반사가 없다면 적절한 마취 깊이를 시사합니다.
3. 라이브 영상 소프트웨어를 시작하세요. 나타나는 제어판에서 초기화를 클릭하세요. 온도 박스 색상이 초록색으로 변할 때까지 기다려 시료실 내 단계의 온도가 37 °C에 도달했음을 나타냅니다.
4. 쥐를 영상 시스템의 샘플 챔버 내 스테이지(37 °C)에 올려두고, 감염된 화상 부위는 카메라 바로 아래에 둡니다.
   참고: 화상이 건조해지면 박테리아의 생물발광이 감소할 수 있습니다. 따라서 영상 촬영 전에 PBS로 쥐 화상 부위에 보습을 하는 것이 권장됩니다.
5. 제어판에서 '루미센스' 옆에 체크 표시를 하세요. "자동 노출"을 선택하여 라이브 이미징 소프트웨어가 생물발광 강도에 따라 노출 시간을 최적화하도록 하세요.
6. "시야" 드롭다운에서 "C"를 선택하세요. "중간 거리 스캔" 옵션을 선택하면 소프트웨어가 초점 거리를 결정하게 하세요. 오버레이 옆에 체크 표시를 하세요.
7. "획득"을 클릭하여 이미지를 캡처하세요. "Edit Image Label" 박스에서 "OK"를 클릭하세요; "이미지 창"과 "Toll Palette"가 나타납니다.
8. 자동 선택을 위한 자동 ROI 매개변수를 설정하세요.
9. 생물발광 강도를 상대 발광 단위(RLU)로 정량화하고, 분홍색(가장 강한)에서 파란색(가장 약한)까지 가짜 색상 척도로 표시합니다.
10. 생물발광 강도 분석을 바탕으로 쥐 화상에서 박테리아의 생존율을 다양한 시점에서 계산합니다. 특정 시점에서의 박테리아 생존율 = 해당 시점에서 측정된 생물발광 강도 / 항균 청색광 노출 직전 측정된 생물발광 강도.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
IVIS	퍼킨엘머 주식회사, 월섬, 매사추세츠	IVIS 루미나 시리즈 III	전임상 생체 영상
발광 다이오드 LED	비라이트 주식회사, 토론토, 캐나다	415 해리	조명용 광원
마우스	찰스 리버 연구소, 윌밍턴, 매사추세츠	BALB/c	7-8주 생후, 17-19g 체중
아시네토박터 바우만니	텍사스 포트 샘 휴스턴의 브룩 육군 의료 센터	임상 분리	인공 발광 변형
그라이너 요리	시그마-올드리치 주식회사	P5112-740EA	35 mm ×10 mm