마우스 모델에서 화상 상처의 약물 내성 박테리아 감염에 대한 청색광 치료

초록

출처: 왕, Y. 외. 생물발광 영상을 이용한 다약물 내성 아시네토박터 바우만니 화상 감염에 대한 항균 청광 치료의 생체 내 연구. J. Vis. 경험 (2017)

이 영상은 생쥐에서 생물발광 약물 내성 박테리아로 인한 화상 감염을 블루라이트 치료를 시연한 후, 치료 효과를 모니터링하기 위한 생물발광 영상을 시연합니다.

프로토콜

동물 모델이 포함된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 심사 위원회에서 검토되었습니다.

1. 쥐의 A. baumannii 감염에 대한 항균 청색광 치료

1. 케타민-자일라진 혼합 제도를 복강 내 주사(100 mg/kg - 20 mg/kg)로 마취합니다. 백 반사가 없다는 것은 적절한 마취 깊이를 시사합니다.
2. 쥐를 무작위로 aBL 처리된 그룹(n = 10)과 처리하지 않은 대조군(n = 10)으로 나눕니다.
3. 항균 청색광(aBL) 처리군의 경우, 쥐의 눈을 알루미늄 호일로 가려 과도한 빛 노출을 방지하세요. 생쥐 화상을 발광 다이오드(LED) 바로 아래에 놓고, 35mm 페트리 접시 뚜껑을 쥐 복부 아래에 올려 등이 수평으로 유지되도록 합니다.
4. 3.5단계에서 언급한 전력/에너지 미터를 네모난 페트리 접시 위의 마우스로 교체하세요. 마우스 높이를 다시 조정하여 LED 조리개와 마우스 표면 사이의 거리가 파워/에너지 미터의 빛 센서 레벨과 같아지도록 합니다.
5. 감염된 화상을 100 mW/cm²의 방사선 방사선으로 조사하세요. aBL을 72 J/^{cm 2} 의 용량으로 투여하여 총 360 J/cm² 에 도달할 때까지 투여합니다(예: 0, 72, 144, 216, 288, 360 J/cm²). 각 조명 투여 후에는 쥐에 대해 생물발광 영상을 수행하세요.
6. 처리되지 않은 대조군의 경우, aBL 처리군과 동일한 시간 간격으로 쥐 화상에 대한 생물발광 영상을 수행하였습니다.
7. 쥐가 회복되기 전에, 생쥐를 물 가열된 수술용 침대 위에 눕혀 열 손실과 저체온증을 예방하세요. 회복할 때까지 쥐의 활동과 손 반사를 관찰하세요. 쥐를 회복한 후에는 우리당 2-3마리를 수용하세요.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
IVIS	퍼킨엘머 주식회사, 월섬, 매사추세츠	IVIS 루미나 시리즈 III	전임상 생체 영상
발광 다이오드 LED	비라이트 주식회사, 토론토, 캐나다	415 해리	조명용 광원
전력/에너지 계	토를랩스, Inc., 뉴턴, 뉴저지	PM100D	빛 복사 검출기
마우스	찰스 리버 연구소, 윌밍턴, 매사추세츠	BALB/c	7-8주 생후, 17-19g 체중
아시네토박터 바우만니	텍사스 포트 샘 휴스턴의 브룩 육군 의료 센터	임상 분리	인공 발광 변형
인산염 완충 식염수, 1x 용액	피셔 사이언티브	BP24384	많은 생체분자 절차에서 사용되는 표준 인산 완충제
피셔 사이언티픽 레디팁 피펫 팁, 1-200 μL	피셔 사이언티브	02-707-502	피펫 팁
황동 블록	스몰 파츠, Inc., 마이애미, 플로리다	10 mm x 10 mm	쥐에서 화상 발생을 위해
익스트림 드래곤 PBI/케블라 고열 장갑	슈피리어 글러브 웍스 주식회사, 치크토와가, 뉴욕	PBI83514	내열 장갑
그라이너 요리	시그마-올드리치 주식회사	P5112-740EA	35 mm ×10 mm
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