아그로박테리움 매개 재조합 바이러스 클론을 옥수수 묘목에 전달하여 유전자 침묵을 위한 방법

초록

출처: Beernink, B. M. 외 재조합 여우꼬리 모자이크 바이러스와 사탕수수 모자이크 바이러스 감염성 클론을 주입하여 옥수수 묘목을 직접 농연균화합니다. J. Vis. 경험 (2021)

이 영상은 아그로박테리움 매개 재조합 바이러스 클론을 옥수수 묘목에 전달하여 유전자 침묵을 시연합니다. 이 연구는 아그로박테리움 감염, 전신 바이러스 확산, RNA 간섭에 의한 표현형 변화 과정을 개괄합니다.

프로토콜

1. 주입
참고: 4-7일 된 옥수수 묘목은 주사용으로 사용할 수 있습니다. 묘목 성장 속도는 성장 조건, 광합성 활성 방사선(PAR) 양(즉, 온실에서 성장실보다 더 높은 PAR), 유전자형 등 온실에서 조절하기 어려운 여러 요인에 크게 영향을 받습니다. 식물은 잎이 확장되지 않은 2-3cm 높이의 어린 4일, 그리고 가장 아래쪽 둥근 끝 잎이 확장된 7일째 된 식물까지 주입할 수 있습니다. 이 접종 방법의 성공률은 파종 후 7일 이상 식물이 나이가 들수록 급격히 떨어집니다. 주입 부위는 묘목의 나이와 상관없이 동일합니다.

1. 안전 고글을 착용한 채, 25G x 5/8" 바늘을 1mL 일회용 주사기에 부착하여 박테리아 부탁액을 대리정치절 위 2-3mm 지점에 주입하세요.
   참고: 딱정수리 결절은 결국 왕관 뿌리가 형성되는 부위입니다. 이곳은 식물에서 가장 낮은 마디입니다. 일반적으로 노드 아래와 그 아래에서 녹색에서 흰색으로 색상이 바뀝니다. 주입 위치는 분열조직 바로 위에 있습니다. 이 단계에서 몇 개의 묘목을 해부하면 분열조직의 위치를 시각화하고 적절한 주입 부위를 파악하는 데 도움이 될 수 있습니다.
2. 식물의 성장 단계에 따라 주사기에 부드럽게 압력을 가해 부유액이 코옵틸을 채우거나 소용돌이에 보이게 만듭니다. 이는 약 100-200 μL 부유액에 해당합니다.
   참고: 현탁액을 묘목에 주입하기 어렵다면 주입 부위가 너무 낮을 수 있습니다. 서스펜션을 주입하는 데 필요한 압력은 적당한 정도입니다.
3. 모든 묘목을 주입하고, 각 구조물마다 주사기와 바늘을 교체하세요.

2. 지속적인 식물 관리

1. 주입한 묘목은 7-8일 되었을 때 13 x 13 x 15cm 이상의 화분에 이식하세요.
2. 성장 조건(16시간 광주기, 주 1회 비료 주기)을 유지하세요.

3. 감염 확정(표현형상)

1. 식물의 표현형적 점수는 접종 후 14일에서 21일 사이에 측정됩니다(DPI). 대조 유전자 사모 22 병변 또는 피토엔 탈사투라제 로 인한 병변은 잎에서 쉽게 관찰되며, 이는 FoMV 증상과는 구별됩니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
1 mL 주사기	피셔 사이언티브	14955450	또는 BD 309659
아그로박테리움 투메파시엔스 균주 GV3101			실험실 재고에서 T-DNA 전달 기계인 RifR, GmR을 암호화하는 vir 플라스미드를 운반합니다
비료			피터스 비료 15-15-15 농축액
대형 화분	코드록	SQL0550	5x5x4" 이상이에요. 묘목 이식을 위해서요.
옥수수 황금 반탐 단옥수수 씨앗	아메리칸 메도우스, 웨스트 코스트 씨앗
토양 기질	선그로 원예	SS#1-F1P	Sunshine Mix #1/Fafard-1P, 옥수수가 잘 자라는 토양 혼합물이면 충분합니다