생세포 형광현미경을 이용한 박테리아의 형태학적 변화 영상

Abstract

출처: 브조조프스키, R. S. 외 박테리아의 세포 내 세포 내 단백질 위치 및 세포 형태 변화를 조사하기 위한 생세포 형광 현미경. J. Vis. 경험 (2019)

이 영상은 박테리아의 형태학적 변화를 실시간으로 시각화하기 위한 생세포 형광현미경을 시연합니다. 이 문서는 실시간으로 고해상도 이미지를 얻기 위한 영상 촬영, 타임랩스 획득, 디컨볼루션 과정을 개괄합니다.

Protocol

1. 영상

1. 실험 당일, 현미경 시스템을 켜세요. 영상 소프트웨어( 재료표 참조)를 시작하려면 바탕화면의 해당 아이콘을 클릭하세요. 소프트웨어 시작 대화상자에서 현미경이 표시된 초기화 옵션( Initialize Microscope ) 옵션을 클릭하여 현미경을 초기화하세요. 초기화 전에 현미경 거칠 조정을 통해 대물렌즈가 완전히 낮아졌는지 확인하세요.
   참고: 초기화 후에는 시작 메뉴 외에도 세 개의 추가 대화 상자가 나타납니다: resolve3D, 데이터 수집, 필터 모니터.
2. 제조사에서 제공한 100배 오일 침수 대물렌즈에 1.517(굴절률) 오일을 떨어뜨립니다(수치 조리개 = 1.4, 작업 거리 = 0.12 mm; 재료표 참조).
   참고: 영상 촬영이 이루어지는 온도에 맞는 적절한 침수 오일을 선택하는 것이 중요합니다.
3. 샘플이 담긴 유리 바닥 접시를 금속 하우징(관)에 넣고 부드럽게 무대 클램프에 넣습니다.
4. 거친 조절 노브를 사용해 대물렌즈를 들어 올려 기름이 접시 유리 바닥에 닿게 하세요. 접안렌즈와 미세 조절 노브를 사용해 샘플을 초점에 맞추세요. 셀이 초점이 맞춰지면,....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
아가로스	피셔 바이오리시약	BP160-100	분자생물학 등급 - 저평생 농업률
FM4-64	인비트로젠	T3166	현미경
유리 바닥 접시	맷텍	P35G-1.5-14-C	현미경
현미경	GE	델타비전 엘리트	맞춤형 올림푸스 IX-71 역현미경 스탠드; 맞춤형 조명탑과 투과광 조명 모듈. 대물렌즈: PLAPON 60X (N.A. 1.42, WD 0.15 mm); 올리 100X 오일(N.A. 1.4, WD 0.12 MM); 100X 목표 팀의 DIC 프리심 노마르스키; 쿨스냅 HQ2 카메라; SSI 어셈블리 7-컬러; 환경 제어 챔버 - 불투명함.
PC190723	밀리포어 시그마	3445805MG	FtsZ 억제제
소프트웍스	GE		제조사 제공 이미징 소프트웨어