강화된 파리 샘플에서 식품 매개 병원체의 PCR 기반 검출

초록

출처: 파바-리폴 외 개별 오물파리에서 식중독성 박테리아 병원체 검출. J. Vis. 경험 (2015)

이 영상은 병원체 특이적 정제를 사용해 농축된 파리 샘플에서 표적 박테리아 DNA를 증폭하는 PCR 기반 방법을 시연하며, 이를 통해 실시간 형광 검출과 용융 곡선 분석을 통해 개별 곤충 내 식중독성 병원체 존재를 확인할 수 있게 합니다.

프로토콜

1. 하이드레이트 PCR(중합효소 연쇄 반응)-준비 정제

1. 냉각된 4 °C PCR 냉각 블록을 선택하고 인서트 위에 PCR 튜브 랙을 설치합니다.
2. 선반 파일에 따라 표적 식중성 병원체에 대한 PCR 준비 태블릿(각 키트에 포함된 PCR 준비 정제)을 홀더에 배치하세요.
3. 디캡 도구를 사용해 PCR 튜브의 캡을 조심스럽게 제거하세요. 캡을 버리고 각 튜브에 태블릿이 들어 있는지 확인하세요.
4. 살 모넬라 및 크로노박터의 경우 50 μl 또는 L. monocytogenes의 경우 30 μl의 용해액을 특정 PCR 튜브로 옮깁니다. 새 광학 캡을 사용하고 캡핑 도구를 사용해 PCR 튜브에 단단히 고정하세요.
   참고: 용해액을 PCR 준비 정제에 첨가한 후, 샘플은 PCR 기반 검출 시스템에 로드될 때까지 2 - 8 °C에서 냉각 상태를 유지해야 합니다. PCR 튜브는 2,500 x g에서 몇 초간 원심분리하여 튜브 바닥에 전체 부피가 집중되도록 할 수 있습니다.
5. PCR 튜브를 기기 서랍을 열어 PCR 사이클러/검출 시스템 기기에 삽입합니다.
6. 서랍 안의 웰에 PCR 튜브 선반을 넣고 튜브가 제대로 꽂혔는지 확인하세요.
7. 서랍을 닫고 제조사 프로토콜에 따라 프로그램을 실행하세요.
   참고: PCR 기반 기기는 각 식중성 병원체별로 미리 설정된 사이클링 매개변수를 갖추고 있습니다.
8. PCR 사이클링 상태 바에 증폭 부분이 작동 중임을 나타내는 파란색 바가 표시되는지 확인하세요.
   참고: 표준 PCR 분석의 경우, 전체 프로그램(증폭 및 검출)의 처리 시간은 약 3시간에서 3.5시간 정도 소요됩니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
캡핑 도구	듀폰	D11677028
캡 제거 도구	듀폰	D11134095
PCR 튜브 랙/홀더	듀폰	D12701663
미세한 끝, 직선 팁 겸자	바이오퀵	4731	사용 전에 반드시 소독하세요. 여러 공급업체가 있습니다.
냉각 블록			여러 공급업체가 있습니다.
원심분리기			여러 공급업체가 있습니다.