감염된 쥐의 장 조직에서 아미노산 대사산물의 시각화

초록

출처: Specker, J. T. 외 감염 중 한천과 조직에서 배양된 박테리아 군락의 영상 질량분석법을 통한 미생물 협력 조사. J. Vis. 경험 (2022)

이 영상은 클 로스트리디오이데스 디피실에 감염된 쥐의 장 조직 내 아미노산 분포를 단독으로, 또는 Enterococcus faecalis와 병용하여 시각화하기 위해 매트릭스 보조 레이저 탈착/이온화(MALDI) 질량분석법을 시연합니다. 이 절차는 조직 준비, 기질 도포, 레이저 이온화, 아미노산 이온 검출을 통해 공간 이온 이미지를 생성합니다. 결과는 E. faecalis 가 오르니틴을 방출하고 아르기닌을 고갈시켜 장내 환경을 변화시키고, 이를 통해 C. difficile 의 병인성을 강화하는 미생물 협력을 보여줍니다.

프로토콜

동물 모델이 포함된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 심사 위원회에서 검토되었습니다.

1. 비감염 대조군 및 C. difficile 감염 마우스 맹장 조직의 준비 및 운송
   1. 4-8주 된 수컷 쥐 C57BL/6마리에게 항생제(0.5 mg/mL 세페페라존 또는 0.5 mg/mL 세페페라존 + 1 mg/mL 반코마이신)를 5일간 음 용수에 접종하고, 이후 2일간 회복 후 감염을 시행합니다.
   2. 동물들을_CO2 질식사로 안락사시키고, 쥐의 맹장 장기를 즉시 채취하세요. 증류수에 최적 절단 온도(OCT) 화합물을 20% 혼합물에 박습니다.
   3. 샘플을 드라이아이스 위에 올려놓고 포장하여 분석을 위해 배송합니다; 분석할 때까지 -80 °C에서 보관하세요.

 

2. 감염되지 않은 대조군과 C. difficile 감염 마우스 맹장 조직의 냉동절리 비교

1. 모든 냉동분리 장비를 100% 에탄올로 헹구고 건조한 후 샘플을....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
0.2 μm 타이탄3 나일론 주사기 필터	써모 사이언티픽	42225-NN
1,5-디아미노나프탈렌 MALDI 매트릭스	시그마 올드리치	2243-62-1
20 mL 헨케 젝트 루어 락 주사기	헨케 사스 울프	4200.000V0
275i 시리즈 대류 진공 게이지	커트 J. 레스커 회사	KJL275807LL
스마트빔 II Nd:YAG MALDI 레이저 시스템(2 kHz, 355 nm)이 장착된 7T solariX FTICR 질량분석기	브루커 달토닉스
HPLC에 적합한 아세트산 용액	시그마 올드리치	64-19-7
아세토니트릴, HPLC 적합, 경배 등급, ≥99.9%	시그마 올드리치	75-05-8
수산화암모늄 용액, 28% H2O에 NH3, ≥99.99% 미량 금속 기반	시그마 올드리치	1336-21-6
오토클레이버 가능한 바이오하저드 백: 55갤런	그레인저	45TV10
생물학적 위험 표본 운송 가방 (8 x 8인치)	피셔 사이언티브	01-800-07
뇌 심장 주입 육수	BD 생명과학	90003-040
C57BL/6마리 수컷 쥐	잭슨 연구소
CanoScan 9000F Mark II 사진 및 문서 스캐너	정식 설정(캐논)
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다이아몬드 팁 스크라이버, 전자현미경 과학	피셔 사이언티브	50-254-51
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최적 절단 온도(OCT) 화합물	피셔 사이언티브	23-730-571
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