시험관 내 박테리아 바이오필름 형성을 위한 챔버드 커버글라스 방법

초록

출처: Beaudoin, T. 외 챔버 커버글라스 모델을 이용한 가래가 바이오필름 형성에 미치는 영향을 시각화하기. J. Vis. 경험 (2016)

이 영상은 챔버 캡글라스를 사용하여 환자 유래 가래 숙주 인자가 박테리아 바이오필름 발달에 미치는 영향을 연구하는 방법을 시연합니다.

프로토콜

샘플 채취와 관련된 모든 절차는 기관의 IRB 지침에 따라 수행되었습니다.

1. 바이오필름 형성을 위한 챔버드 커버글라스 방법
   1. 관심 박테리아 분리균을 37°C에서 200rpm 흔들며 밤새 배양합니다.
      참고: 임상용 분리균인 Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Burkholderia cepacia complex, Achromobacter xylosoxidans 등 다양한 박테리아가 사용되었습니다.배지 선택은 균주와 관심 조건에 따라 다르지만, (루리아 육수) LB 배지는 초기 실험에 사용할 수 있습니다.
   2. 하룻밤 배양 후 40μl의 배양물을 4ml의 신선한 배지에 넣고, 37°C에서 3-4시간 동안 진동(200 RPM)으로 증육하면 600 nm(OD600)에서 광학 밀도가 약 0.5-0.6의 배양물을 얻습니다.
   3. 1.2단계부터 1/5단계까지 배양물을 원하는 배지에서 10% 가래 여과액 또는 대조군으로 가래 여과액 없이 희석합니다. 다른 가래 여과액 농도(예: 50% 또는 100%)도 검사할 수 있습니다.
   4. 희석액 200μl를 사용해 슬라이드 챔버의 우물을 시딩합니다.
   5. 37°C에서 박테리아가 흔들리지 않고 4시간 동안 붙도록 하세요.
   6. 4시간 후에는 배지를 제거하고 생체막을 1배 신선한 배지로 부드럽게 세척하세요. 200μl의 신선한 배지로 교체하세요.
      참고: 가래가 바이오필름에 미치는 영향을 연구하려면 신선한 배지에 가래 상청액이 포함되어야 합니다.
   7. 바이오필름을 37°C에서 원하는 시간 동안 흔들지 않고 성장시키고, 현미경 검사 때까지 세척 없이 매 매 매 교체하세요.
      참고: 가래 상원액이 바이오필름 항생제 감수성에 미치는 영향을 연구하기 위해, 바이오필름 성장 후 24시간 후 배지에 항생제를 첨가하고, 바이오필름 염색 및 영상 검사 전까지 배지에 유지합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Lab-Tek II 챔버드 커버글라스, #1.5 붕규산염, 8웰	써모 지처 사이언티브	155409
밀러스 라인배커 브로스	써모피셔 사이언티브	12780-052	야간 성장/바이오필름 성장용 표준 배지