세균성 폐 감염을 확립하기 위한 마우스 구인두 흡인 모델 준비

초록

출처: Nielsen, T. B. 외, 인공호흡기 관련 및 병원 내 획득성 세균성 폐렴의 쥐 구인두 흡인 모델. J. Vis. 경험 (2018)

이 영상은 마취된 쥐의 폐로 박테리아를 전달하여 폐 감염을 유도하고 면역 반응을 유도하는 과정을 시연합니다.

프로토콜

동물 모델이 포함된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 심사 위원회에서 검토되었습니다.

1. 마우스 접종/감염

1. 마취된 쥐를 꼭대기 앞니로 매달아 강하고 가느다란 끈(예: 치실)에 매달고, 이 끈은 마우스 몸 길이의 약 두 배(예: 실험실 작업대) 높이에 고정된 물체에 고정됩니다.
2. 멸균된 둔한 겸자로 쥐의 혀를 부드럽게 입 밖으로 빼내세요. 혀를 멸균된 장갑 낀 손가락으로 옮겨 쥐의 혀가 실수로 눌리는 것을 방지하세요. 혀를 입 밖에 두어 구인두에 접근할 수 있게 하고, 접종물이 옆으로 삼키는 것을 막으세요.
3. 마우스의 혀를 잡은 상태에서 50 μL 접종체(박테리아 현탁액)를 마이크로피펫을 이용해 구인두에 넣습니다; 구강인두는 구강과 인두가 만나는 지점, 입 뒤쪽에 위치합니다.
   참고: 액체는 마이크로피펫의 첫 번째 정착점까지 피펫으로 전달하는 것이 매우 중요합니다. 접종기가 구인두에 놓이면 쥐는 몇 초간 호흡을 멈춥니다; 결국 반사적 흡인으로 쥐는 박테리아 현탁물을 흡입하게 되고, 이는 액체가 폐로 들어올 때 나는 독특한 '탁' 소리로 나타나 폐렴 감염을 초래합니다.
4. 접종구가 정상 호흡을 막을 만큼 충분히 뒤쪽에 위치하지 않는다면, 겸자로 비추를 집어 입을 통한 반사 흡인 후 접종구를 들이마시게 합니다.
5. 접종 후에는 혀를 놓고, 마우스를 현수줄에서 빼서 케이지에 넣고, 마취에서 깨어날 때까지 관찰하세요.

2. 질병 진행 모니터링

참고: 동물의 고통으로 인해 쥐가 죽음에 빠질 때 다양한 지표를 사용해야 합니다; 이 결정 후 이전에 승인된 IACUC 프로토콜에 따라 안락사가 시행되어야 합니다; 사망의 다양한 지표로는 체온, 체중 감소, 외모, 보행 및 혈액(예: iSTAT)에서 얻을 수 있는 기타 바이오마커가 포함됩니다.

1. 이전에 승인된 IACUC 프로토콜(예:_CO2 후 자궁경부 탈구)에 따라 쥐를 안락사시키십시오.
2. 안락사한 쥐의 폐는 기관, 폐동맥, 폐정맥을 폐 근처에 절단하여 제거하세요.
   1. 현미경
      1. 폐(또는 일부)를 표본 몰드에 넣으세요.
      2. 최적 절단 온도(O.C.T.) 화합물로 표본 몰드를 채우고 조직을 완전히 잠깁니다.
      3. 샘플을 -80 °C에서 냉동하세요.
      4. 샘플을 병리학 실험실로 보내 절절 절단 및 슬라이드에 부착하여 현미경 검사를 하세요.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
마취실	켄트 사이언티픽 코퍼레이션	베트플로-0720	최대 5마리의 마우스를 수용할 수 있습니다
크라이오몰드, 중간 크기	사쿠라 티슈텍	4566	일회용 비닐 표본 몰드, 15×15×5 mm
치실	구술-B	37000469537	테이블 높이에서 약 6인치 높이의 마구간 기둥에 묶어
겸자	VWR	82027-440	마우스 입에서 혀를 부드럽게 빼내는 데 사용했어요
마취용 이소플루란	애벗	10015516	대체 약물도 사용할 수 있습니다; 절차에 맞게 수정하세요
iSTAT 카트리지	애벗	03P79-25	필요에 맞는 다양한 카트리지가 제공됩니다
케타민, 100 mg/mL	웨스턴 메디컬 서플라이	4165	PBS에 1:10을 희석하여 1 mg/mL로 만들고 자일라진과 1 mg/mL로 혼합합니다
눈 연고	아콘	눈물이 다시 흐른다	디스펜서 끝으로 눈을 접촉하지 마세요
인산염 완충 식염수(PBS)	코닝	21-031-CM	칼슘과 마그네슘이 없는 둘벡코 PBS
피펫 팁, 200-μL	VWR	10017-044	사용 전 오토클레이브
피페터, 200-μL	길슨	피펫만 P200	사용 전 오토클레이브와 교정
확산기, 박테리아 세포	벨-아르트	F377360006	사용 전에 베이킹이나 오토클레이브로 멸균하세요
바이알, 저온 보존, 2.0 mL	코닝	430659	농축된 박테리아 접종체의 극저온 저장에 사용됩니다