토양이 없는 시스템에서 애 기장대 뿌 리의 박테리아 정착 모니터링

초록

출처: 해리스, S. L. 외 부유 수경재배 시스템에서 애기장대 뿌 리의 박테리아 정착 및 유지 모니터링. J. Vis. 경험 (2019)

이 영상은 토양이 없는 환경에서 자란 Arabidopsis thaliana 묘목에서 뿌리 관련 박테리아의 정착 상태를 모니터링하는 프로토콜을 시연합니다. 집락화 후에는 초음파 검사로 박테리아를 떼어내고, 희석, 도금 및 배양하여 박테리아 부착과 생존 가능성을 반영하는 집락을 형성합니다.

프로토콜

생존 가능한 세포 수를 위한 박테리아 수집

참고: 묘목 뿌리당 박테리아 수는 어느 부화 시점에서든 결정할 수 있습니다. 정착은 0시간에서 18시간 사이에 모니터링할 수 있으며, 유지 시간은 18시간부터는 모니터링할 수 있습니다.

1. 묘목을 메쉬에서 제거하세요 (그림 1, 5단계). 잎 아래(잎 쪽 메쉬 쪽)에 불꽃 살균 겸자를 부드럽게 놓고 줄기를 살짝 집습니다. 뿌리를 부러뜨리지 않고 망에서 멀리 옮기도록 묘목을 위로 흔들어 떨어뜨리세요. 뿌리가 부러지면 부드럽게 망 바닥을 긁어 전체 길이를 모으세요.
2. 식물 뿌리에서 박테리아를 제거하세요. 박테리아를 1mL ddH₂0이 포함된 24웰 플레이트의 웰로 옮깁니다. 샘플을 초음파 처리하세요.
3. 뿌리에 있는 박테리아 수를 정량화하세요.
   1. 초음파 검사 샘플을 박테리아 배양지에서 최대 10-6 희석까지 연속적으로 희석합니다. 각 희석액 50μL을 개별 한천 플레이트에 첨가하고 멸균 유리 구슬로 발라줍니다. 박테리아가 가장 적합한 온도에서 배양판을 배양하여 개별 군락이 셀 수 있을 때까지 보관합니다.

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결과

그림 1: A. thaliana 뿌리의 박테리아 정식화 및 유지 분석. 멸균된 플라스틱 망에서 자란 A. thaliana 묘목은 박테리아에 최적화된 배지로 옮겨졌습니다 [여기, 0.1 x LB (Luria Broth) Lennox]. 박테리아는 18시간 동안 뿌리에 정착했고, 식물은 흔들리는 액체 속에 떠 있었습니다. 세척 후, 집락한 부표를 식물에 최적화된 배지(0.5x MS + MES)에 72시간 동안 옮.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
24웰 플레이트	BD 팔콘	1801343
불꽃
겸자
인큐베이터			지정된 박테리아 증식에 최적의 온도에서
멸균수
초음파 검사기
24 뻗은 초음파기 부착물			여러 샘플을 동시에 초음파 처리하는 용도입니다. 개별적으로 할 수 있습니다
유리 구슬
멀티페터/리페터
무균 96웰 플레이트			연속 희석을 위한 것입니다. 에펜도르프 튜브로 대체할 수 있습니다
애기장대 탈리아나 씨앗			씨앗 자원에는 애기장대 생물자원센터를 추천합니다
Pseudomonas simiae WCS417r