성장 조절 단백질 영상을 위한 시아노박테리아 색소 광표백

초록

출처: 잔, Y. 외 광표백은 시 아노박테리아 프로클로로코커스의 FtsZ 고리의 초해상도 이미징을 가능하게 합니다. J . Vis. Exp. (2018).

이 영상은 저온 환경에서 제논 빛을 이용해 남세균 세포에서 광표백하는 과정을 시연하여 성장 조절 단백질의 형광 이미징을 개선합니다.

프로토콜

1. 블로킹 단계에서 엽록소 색소의 광표백

1. 커버슬립을 스테인팅 접시로 옮기세요. 커버슬립 위에 0.2%(v/v) 비이온 세제 100과 염소 혈청 3%(v/v)가 포함된 블로킹 버퍼 50 μL을 추가합니다.
2. 전체 염색판을 얼음 위에 올려놓고 제논 광원 아래에 최소 60분 동안 광표백을 하면서, 빛 강도는 1,800 μmol/m²·s로 사용하세요.
3. 광표백과 블로킹 후에는 종이 타월 가장자리로 블로킹 버퍼를 조심스럽게 제거하세요.
   참고: 제논 빛의 강도가 매우 높아 눈 보호를 위해 적절한 선글라스가 필요합니다. 그동안 빛의 누출을 막기 위해 조명과 플레이트를 알루미늄 호일로 감싸 눈 손상을 방지하세요. 커버슬립을 15분마다 확인해 촉촉하게 유지되는지 확인하세요. 건조하면 50 μL 블로킹 버퍼를 추가하세요.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
폴리스티렌 입자	스페로텍	PP-20-10	2.0-2.4 μm
커버슬립	마리엔펠트	111580	18 mm ∅, 두께 1번
에탄올	샬라우	ET00021000
폴리-L-라이신 하이드로브로마이드	시그마-올드리치	P9155	MOL 중량 70,000-150,000
파라포름알데히드	시그마-올드리치	158127
글루타알데히드 용액, 50%	시그마-올드리치	340855
PBS	시그마	P3813
트리톤 X-100	시그마	T8787
EDTA 이나트륨 소금, 2-하이드레이트	골드 바이오테크놀로지	E-210-500
트리즈마 기지	시그마	T1503
라이소자임	시그마	L6876
염소 혈청	시그마	G9023
XD-300 제논 광원			250W