<ol><li>공초점 영상<ol style='list-style-type:decimal;'><li>DAPI(4',6-Diamidino-2-페닐린돌), EGFP(강화 녹색 형광 단백질), mCherry의 3색 영상을 위해 공초점 현미경을 구성하세요. 다음 설정을 사용하세요: DAPI 여기(ex) 405 nm, 방출(em) 415-480 nm; EGFP ex 488 nm, em 493-564 nm; mCherry ex 587 nm, EM 597-700 nm.</li><li>시료를 현미경에 올려놓고 63X/1.4 수치 구경(NA) 대물렌즈를 사용해 시료에 초점을 맞추세요. 영상 촬영을 위해 원하는 혈구를 시야에서 찾아주세요.</li><li>시료의 적절한 노출을 위해 레이저 출력과 검출기 이득을 조정하세요. 여러 Z-평면을 점검하여 전체 샘플 두께에 적합한 노출 수준인지 확인하세요.</li><li>전체 혈구의 z축에서 위와 아래 위치를 찾아보세요. 이 위치들을 z-섹션의 시작과 종료 위치로 설정하세요.</li><li>혈구가 있는 부위만 스캔 줌으로 촬영하세요. 3배의 줌 인수가 자주 사용됩니다.</li><li>이미지 직렬을 x-y 평면의 1024 x 1024 픽셀, z차원의 0.3 μm 간격과 같은 적절한 해상도로 수집합니다.</li></ol></li></ol>

<table class='ck-table-resized'><tbody><tr><td>콕시엘라 버네티이 - m체리</td><td>하인젠 박사, R.</td><td> </td><td> </td></tr><tr><td>현미경 커버 유리</td><td>피셔 사이언티브</td><td>12-545-80</td><td> </td></tr><tr><td>4'6-디아미디노-2-페닐린돌</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>62247</td><td> </td></tr><tr><td>공초점 미소</td><td>라이카</td><td>TCS SP8-X 백색광 공초점 레이저 주사 현미경</td><td> </td></tr><tr><td>현미경 슬라이드</td><td>피셔 사이언티브</td><td>12-552-3</td><td> </td></tr></tbody></table>

병원체에 감염된 초파리 혈구의 고해상도 공초점 영상

High-Resolution Confocal Imaging of Pathogen-Infected Drosophila Hemocytes

출처: <a href='https://app.jove.com/v/57077/extraction-hemocytes-from-drosophila-melanogaster-larvae-for'>히로야스, A. 외. 미생물 감염 및 분석을 위한 Drosophila melanogaster 유충에서 혈구 추출. J. Vis. 경험 (2018)</a>이 영상은 Coxiella burnetii에 감염된 초파리 흑위 혈구의 고해상도 공초점 영상을 시연하여 병원체 위치를 3D로 시각화하여 세포 내 감염 역학과 숙주-병원체 상호작용을 상세히 분석할 수 있게 합니다.

Source: Hiroyasu, A., et al. Extraction of Hemocytes from Drosophila melanogaster Larvae for Microbial Infection and Analysis. J. Vis. Exp. (2018)This ...

https://cloudfront.jove.com/files/ftp_upload/24520/24520_article_thumb_24520.jpg

고정된 혈구가 들어 있는 슬라이드를 공초점 현미경 스테이지에 올려놓습니다.이 혈구들은 Drosophila melanogaster 유충에서 얻었으며, 박테리아 병원체에 감염된 상태입니다.혈구는 녹색 형광 단백질로 표지되고, 핵은 파란색 염료로 염색되며, 박테리아는 시각화를 위해 붉은 형광 단백질을 발현합니다.현미경을 세 가지 형광체 모두를 검출하도록 구성하여 세포 구획과 병원체를 동시에 추적할 수 있습니다.고해상도 대물렌즈를 사용하여 목표 혈구에 초점을 맞추어 세포 내 세부 정보를 포착합니다.적절한 시료 노출을 달성하고 신호 선명도를 최적화하기 위해 레이저 출력과 검출기 이득을 조정하세요.노출 수준이 적절한지 확인하기 위해 여러 Z-평면을 스캔하세요.상단과 하단 Z 위치를 설정하여 전체 혈구를 촬영하세요.스캐닝 줌을 사용해 관심 있는 혈구를 분리하고 고해상도 3D 이미지를 획득하세요.이 방법은 혈구 내 병원체 위치를 시각화할 수 있게 합니다.공초점 현미경을 DAPI, EGFP, mCherry의 3색 이미징을 위해 구성하세요.시료를 현미경에 올려놓고 63X/1.4 수치 구경 대물렌즈를 사용해 시료에 초점을 맞추세요. 영상 촬영을 위해 원하는 혈구를 시야에서 찾아주세요. 그 후 레이저 출력과 검출기 이득을 조정하여 시료의 적절한 노출을 달성합니다.여러 Z면을 점검하여 전체 샘플 두께에 적합한 노출 수준인지 확인하세요. 다음으로, 전체 혈구의 Z축에서 상단과 하단 위치를 찾습니다. 이 위치들을 Z 구획의 시작과 끝 위치로 설정하세요.스캐닝 줌을 사용해 혈구가 있는 부위를 촬영하세요. 이미지 직렬을 적절한 해상도, 예를 들어 X-Y 평면의 1024 x 1024 픽셀, Z 차원의 0.3 마이크로미터 간격으로 수집합니다.

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Research

연구

JoVE Encyclopedia of Experiments

Microbiology

미생물학

Bacterial Pathogenesis and Host Interactions

세균 병원성 및 숙주 상호작용

bacterial-pathogenesis-and-host-interactions

Infection Models

감염 모델

160 조회수. 고정된 혈구가 들어 있는 슬라이드를 공초점 현미경 스테이지에 올려놓습니다.이 혈구들은 Drosophila melanogaster 유충에서 얻었으며, 박테리아 병원체에 감염된 상태입니다.혈구는 녹색 형광 단백질로 표지되고, 핵은 파란색 염료로 염색되며, 박테리아는 시각화를 위해 붉은 형광 단백질을 발현합니다.현미경을 세 가지 형광체 모두를 검출하도록 구성하여 ...

병원체에 감염된 초파리 혈구의 고해상도 공초점 영상

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관련 논문

이름	회사	카탈로그 번호
콕시엘라 버네티이 - m체리	하인젠 박사, R.
현미경 커버 유리	피셔 사이언티브	12-545-80
4'6-디아미디노-2-페닐린돌	써모피셔 사이언티브	62247
공초점 미소	라이카	TCS SP8-X 백색광 공초점 레이저 주사 현미경
현미경 슬라이드	피셔 사이언티브	12-552-3