우리는 쉽게 다른 뇌 영역 적용할 수 있습니다 organotypic hippocampal 조각을 준비하는 방법을 설명합니다. 뇌 조각이 인터페이스를 형성하기 위해 허용되는 구멍이 세포막과 문화 미디어에 누워있다. 이 방법은 최대 문화에 이주하는 해마의 매출 구조를 유지합니다.
우리는 쉽게 다른 뇌 영역 적용할 수 있습니다 organotypic hippocampal 조각을 준비하는 방법을 설명합니다. 뇌 조각이 인터페이스를 형성하기 위해 허용되는 구멍이 세포막과 문화 미디어에 누워있다. 이 방법은 최대 문화에 이주하는 해마의 매출 구조를 유지합니다.
해마는 변연 계 시스템의 구성 요소, 장기 기억과 공간적 탐색 1 중요한 역할을 담당하고 있습니다. Hippocampal 신경 강력한 정품 인증 짧은 기간 이후에 그들의 연결 강도를 수정할 수 있습니다. 장기 potentiation (LTP)으로 알려진이 현상은, 몇 시간 또는 며칠 동안 지난 수 있으며, 학습과 기억이 가장 적합한 후보기구가되었다. 또한, 해마 3 잘 정의된 해부 및 연결은 시냅스 전달 및 시냅스 소성 4를 공부하는 클래식 모델 시스템을 만들었습니다.
hippocampal 시냅스의 생리에 대한 우리의 이해가 성장하고 분자 플레이어가 확인되자, 시냅스 단백질을 조작할 필요가 필수적이되었습니다. Organotypic hippocampal 문화는 쉬운 유전자 조작과 정확한 약리 개입 가능성을 제공하지만, 일상 문화 dissociated 뉴런 방법보다 더 자연 맥락에서 버렸네 기능을 이해하는 것이 중요합니다 신경 조직을 유지합니다.
여기 우리는 쉽게 다른 뇌 영역 적용할 수 있습니다 hippocampal 조각 준비하고 문화에 방법을 제시한다. 이 방법은 바이러스 감염 5,6 또는 biolistics 7과 같은 다른 방법을 사용하여 유전자 조작을위한 조각에 쉽게 액세스할 수 있습니다. 또한, 조각 쉽게 생화학 assays 8 복구할 수, 또는 영상 9 electrophysiological 실험 10 현미경으로 전송.
1. Hippocampal 조각의 준비를 시작하기 전에.
2. H....
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이 방법은 11. 첫째 Stoppini 외에 기술된 방법에 따라 문화 hippocampal 조각하는 빠른 방법을 제공합니다. 이 프로토콜의 가장 중요한 부분은 조각이 멸균 유지하는 것입니다, 따라서 그것은 적절한 살균 기술을 사용하고 적절히 조직과의 접촉에있는 모든 자료를 소독하고 소독하는 것이 중요합니다.
다른 serums 소스는 조각의 품질에 영향을 미칠 수있다. 우리는 처음 몇 번이나 테스트하는 것이 좋습니다. 오염 문제가 재발하는 경우, 보육 및 오염의 가능성 소스에 대한 조직 문화 후드를 확인하십시오. 모든 절차를 수행하는 동안 살균 기술의 적절한 사용은 필수적입니다.
잘린에서 막과 보육의 조각 배치하는 총 시간은 1.5 시간보다 더 이상이어야합니다. 절차가 너무 오래 걸린다면, 그것은 조각의 건강을 손상됩니다.
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이 작품은 NINDS에 의해 투자되었다 - NIH R01NS060756은
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| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 세포 배양 인서트 | EMD Millipore | PICM03050 | |
| 6 웰 플레이트 | BD Biosciences | 353046 | |
| 조직 절편기 | Stoelting Co. | 51425/51415 | |
| 현미경 | Olympus Corporation | SZX7-ILLD2-100 | |
| 해마 해부 도구 | F.S.T. | 10099-15 | |
| 대형 유틸리티 가위, Perfection | F.S.T. | 37500-00/37000-00 우수성/좌수성 | |
| 아이리스 스패튤라 | F.S.T. | 10093-13 | |
| 직형 스패튤라 | F.S.T. | 10094-13 | |
| 라운드 스푼 마이크로 스패튤라 | VWR international | 57949-039 | |
| 해부용 단일 절삭날 바늘 | Electron Microscopy Sciences | 72946 | |
| 해부용 핀셋 | Dumont | #2 | |
| 소형 해부 가위 | F.S.T. | 14060-10 | |
| MEM Eagle 배지 | Cellgro | 50-019 PB | |
| 열 불활성화 말 말혈청 | Invitrogen | 26050-88 | |
| L-Glutamine (200 mM) | Invitrogen | 25030081 | |
| CaCl2 (1 M) | Sigma-Aldrich | C3881 | |
| MgSO4 (1 M) | Sigma-Aldrich | M2773 | |
| 인슐린 (1 mg/ml), 0.01 N HCl에 용해됨 | Sigma-Aldrich | I0516 | |
| 아스코르브산 용액 (25%) | Sigma-Aldrich | A4544 | |
| D-Glucose | Sigma-Aldrich | G5767 | |
| NaHCO3 | Sigma-Aldrich | S6014 | |
| Hepes | Sigma-Aldrich | H7523 | |
| 수크로스 | Sigma-Aldrich | S5016 | |
| DPBS 내 페놀 레드 용액 0.5% | Sigma-Aldrich | P0290 | |
| KCl | Sigma-Aldrich | P3911 | |
| MgCl2 (1 M) | Sigma-Aldrich | M9272 |
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