RNA 간섭은 유전자의 기능을 분석하는 매우 효과적인 입증되었습니다 Drosophila tracheal 개발. 최저의 유전자 발현에 플라이 배아에 dsRNA를 주입하기 위해 티베트 연구실에서 사용하는 자세한 프로토콜은 그림입니다. 이 기술의 조직 및 장기 개발에 필요한 심사 유전자의 가능성을 가지고 Drosophila.
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이 논문에서
요약
초록
유전자 검사는 복잡한 생물 학적 과정을 한 통찰력을 확보하고 사용할 수있는 가장 강력한 방법 중 하나입니다. 수년 동안 유전자 조작을위한 많은 개선 및 도구 Drosophila 2 사용할 수 있습니다. 곧 두 번 좌초 RNA가 분해 RNA 간섭 (RNAi)가 Drosophila 장기 개발에 유전자 기능을 분석하는 강력한 반대로 유전자 접근 방법을 제공하기 위해 표시되었습니다 Caenorhabditis 엘레간스에서 개별 유전자의 활동을하는 데 사용할 수있는 프리와 멜로 3 초기 발견 이후 4, 5.
폐, 신장, 간, 그리고 혈관 계통을 포함한 많은 장기는, 분기 관 네트워크로 구성하는 중요 교통 유체 또는 가스 6, 7. Drosophila tracheal 형성의 분석은 다른 관형 기관 8 morphogenesis을 연구하는 훌륭한 모델 시스템을 제공합니다. 버클리 Drosophila 게놈 프로젝트는 tracheal 시스템에 표현됩니다 유전자의 수백을 보여주었다. 튜브 형성의 분자 및 세포 메커니즘을 연구하기 위해 도전 tracheal 개발에서 이러한 유전자의 역할을 이해하는 것입니다. 여기, 우리는 최저의 개별 유전자 발현에 Drosophila의 배아에 주입 dsRNA에 대한 자세한 방법을 설명했다. 우리는 성공적으로 dsRNA 주입에 의해 내생 dysfusion (dys) 유전자 발현을 무너 뜨 렸어. Dys는 tracheal 융합 세포의 표현 bHLH - PAS 단백질이며, 그것은 tracheal 지점 융합 9, 10 필요합니다. dys - RNAi 완전히 dys 표현을 제거하고 tracheal 퓨전 결함의 결과. 이것은 비교적 간단한 방법은 Drosophila의 tissure 및 장기 개발을위한 requried 유전자를 식별할 수있는 도구를 제공합니다.
프로토콜
1. 배아 컬렉션
- 25 새장을 설정 ° 2-4일 된 w 1118 flies.Grape 주스 플레이트를 사용하는 C는 수령 전에 1-2일 기간 동안 계란 컬렉션을 동기화하기 위해 하루 동안 매 시간마다 변경됩니다
- 25 1 시간에 대한 배아를 수집 ° C
- 면도날로 중간에 가볍게 절단 포도 주스 한천의 사각형 조각을 잘라 한천의 라인을두고
- 포도 쥬스 한천의 조각에 포도 주스 플레이트에서 배아를 전송하는 금속 프로브를 사용하여 한천의 중간에있는 라인에 45도 각도에서 배아의 긴 축을 가진 직선에서 그들을 라인 업. 약 50 배아의 직선을하십시오. 라인에서 멀리 가리키는 후부 엔드와 모든 배아 지점 같은 방향을 확인하십시오.
- 이중 스틱 테이프의 사각형 조각을 잘라 및 18x18mm 커버 슬립에 놓으십시오.
- 커버 슬립을 더블 스틱 테이프와 배아를 들고
- , 유리 슬라이드에 커버 슬립을 플레이스 약 10 분 공중에 배아를 건조.
- 700 할로 카본 오일의 얇은 층과 배아를 맡아, 지금은 주사를위한 준비.
2. 니들을 풀링
유리 모세관 ....
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토론
dsRNA 주입 방식 현재는 여기에 Drosophila tracheal 개발 유전자 기능의 매우 민감하고 신속한 분석이 가능합니다. 이 방법은 잠재적으로 다른 조직 및 장기 개발을위한 유전자 기능을 분석하기 위해 적용할 수 있습니다.
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공개 사항
관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.
감사의 글
저자 dysfusion cDNA, Dys 항체 및 W 1118 파리, 스티븐 크루스 감사하고 싶습니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| Halocarbon oil 700 | Sigma-Aldrich | H8898 | |
| Picospritzer III 피코펌프 | Parker Hannifin Corporation | 051-0500-900 | |
| 마이크로 파이펫 | Fisher Scientific | 21170M | |
| 마이크로로더 | Eppendorf | 930001007 |
참고문헌
- St Johnston, D., Nusslein-Volhard, C. The origin of pattern and polarity in the Drosophila embryo. Cell. 68, 201-219 (1992).
- Venken, K. J., Bellen, H. J. Emerging technologies for gene manipulation in Drosophila melanogaster. Nat. Rev. Genet. 6, 167-178 (2005).
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