출생 후의 두뇌에의 연결을 마이 그 레이션의 고해상도 시간 경과 이미징을위한 Organotypic 슬라이스 분석

요약

이 프로토콜은 주동이의 철새 스트림에서 출생 후의 두뇌와 neuroblast 마이 그 레이션의 고해상도 시간 저속 영상에 최적화된 organotypic 슬라이스 분석을 설명합니다.

초록

전구 세포, neuroblasts의 마이 그 레이션뿐만 아니라, 기존의 신경 회로에 분화하고 새로운 뉴런의 통합의 확산 : 출생 후의 두뇌에 Neurogenesis 세 생물 학적 사건의 유지에 따라 달라집니다. 후각 구근의 출생 후의 neurogenesis 들어,이 이벤트의 세 가지 해부학적인 몸의 구조 별개의 도메인 내에서 차별과 같습니다 확산은 크게 neuroblasts이 주동이의 철새 스트림 (RMS)를 통해 통과 마이 그 레이션, 측면 심실의 subependymal 구역 (SEZ)에 발생, 새로운 뉴런이 차별과 후각 구근 (OB) 내에 통합할 수 있습니다. 세 도메인은 독특한 생물 학적 사건의 각 조절, 세포 분자 및 생리 메커니즘을 연구하기 위해 이상적인 플랫폼 역할을합니다. 본 논문은 세포 조건이 밀접하게 neuroblasts 마이 그 레이션에 대한 생체내 환경에서을 모방하는 출생 후의 뇌 조직에 최적화된 organotypic 슬라이스 분석을 설명합니다. 우리는 우리의 분석은 RMS 이내 neuroblasts의 균일한 지향하고, 빠른 움직임을 위해 제공하는 것으로 나타났습니다. 이 분석은 다른 유전 배경에 생쥐에서 간 이식의 방법을 활용하여의 연결을 마이 그 레이션의 세포 자치가 아닌 자율 규제의 연구에 대해 매우 적합합니다.

프로토콜

I. 절차

다음 기술은 소독 도구를 사용하여 층류 후드에서 무균 조건 하에서 수행되어야합니다.

organotypic 조각 유리 바닥 요리 준비

1. 요리는 무균 환경에서 준비 및 소독 도구를 사용해야합니다.
2. 슬라이스 매체의 150μL 방울 (레시피 참조) 매체 공기 방울을 피하기 위해주의와 접시의 유리 바닥 부분의 중앙에 배치됩니다.
3. unglued 한쪽을 떠나면서, 문화 요리의 중심을 차지하고 원형 coverslip에 인접한 사각형 가장자리에 배치 -이 23 게이지 바늘, 접착제의 여러 명소 (엘머의, 고양이 # E904 고무 시멘트)가 장착된 일회용 주사기 유체 교환 (그림 1). 접착제의 나열 형식은이 프로토콜에 적용 조각이나 세포에 독성되지 않습니다. 관리는이시 침해 나중에 조각의 이미지를 방해하므로 유리 커버 슬립에 대한 접착제를 배치하지 않도록 부여해야합니다. nucleopore 막가 (직경 25mm, 구멍 크기는 8.0μm - 왓먼, 고양이 # 110614) 대신에 그것을 확보하기 위해 접착제 명소를 사용하여 유리 coverslip 위에 위치합니다. 기포가 유리 coverslip와 멤브레인 사이에서 고민하지 않는 확보하면서 이것은, ....

토론

RMS에의 연결을 마이 그 레이션은 후각 구근 ¹ 출생 후의 neurogenesis의 필수 구성 요소입니다. RMS를 통해 마이 그 레이션은 뇌의 표면에 접선 비행기에서 발생합니다. Tangentially 마이 그 레이션 neuroblasts은 반경들의 시조 소스의 위치뿐만 아니라 최종 제품의 연결 ^{1, 2, 3} 분기하는 운명에 따라 세포를 마이 그 레이션와는 있습니다. 출생 후의 RMS에 tangentially 마이 그 레이션하는 세포의 비교적 순수한 인구는 해부학적인 몸의 구조 정의 지역 접선 마이 그 레이션의 메커니즘을 연구를위한 최적의 플랫폼을합니다. 의 연결을 마이 그 레이션의 세포 및 분자 메커니즘을 파악하는 것은 많은 neurodevelopmental 질환 (예를 들어, 참조. ⁴⁾ 이해 중요합니다. 이 지식은 더욱 뇌 종양의 형성과 확산 (예 참조. ⁵⁾ 기초 메커니즘의 식별을 용이하게하고, 미래의 연결 교환 전략에 부상이나 neuro.......