마우스 방광 벽 주입은 orthotopically 방광 줄기 세포와 암 생물학을 연구하는 유용한 방법입니다. 이 섬세한 microsurgical 방법은 신중 기술과 연습 마스터하실 수 있습니다.
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이 논문에서
요약
초록
마우스 방광 벽 주입은 orthotopically 줄기 세포, 평활근, 그리고 암 생물학을 포함하여 방광 현상을 연구하기위한 유용한 기술입니다. 주사를 시작하기 전에, 수술 지역은 비누와 물로 및 살균 솔루션을 청소해야합니다. 수술 장비는 사용하기 전에 각각의 동물 사이에 소독해야합니다. 각각의 마우스는 흡입 isoflurane 마취 배치 (유도에 대한 2~5%, 유지 보수 1-3 %)와 방광 가위로 복부 정중선 절개하여 노출됩니다. 방광이 가득있다면, 두 손가락 사이 압박에 의해 부분적으로 부드럽게 풀립니다. 관심의 세포 현탁액은 intramurally 29 또는 30 게이지 바늘 1 CC 또는 작은 주사기를 사용하여 방광의 돔 벽에에 주입합니다. 상처는 상처 후 클립과 온난 패드를 복구하는 허용 마우스를 사용 닫힙니다. 방광 벽 주입은 연습 마스터 수있는 민감한 microsurgical 기법입니다.
프로토콜
1. 마우스 블레더 월 주입
마우스 변형, 연령 및 성별의 선택은 실험 요구에 의해 결정됩니다. 이것이 노화하기 전에 면역 성숙의 윈도우이기 때문에 우리는, 나이, 8, 12 주 정도 마우스를 사용합니다. 일반적인 지침으로, 생쥐가 스트레스 유발 혼란함을 주죠 요인을 방지하기 위해 실험 조작하기 전에 적어도 한 주에 도착해야합니다.
- 비누와 물로 수술 테이블 표면을 청소하십시오.
- Cide의 Swipes 또는 살균 잎사귀와 수술 테이블 표면을 닦아주십시오.
- 수술에 사용하기 전에 깨끗한 수술 악기 압력솥.
- 또한, 사용하는 즉시 사전 핫 구슬 살균기와 수술 도구를 소독뿐만 아니라, 수술하는 동안 동물 사이.
- 100 μL 해밀턴 주사기 29 또는 30 게이지 (긴 2분의 1 인치) 처음 사용하기 전에 절대 알코올로 반복 흡인과 주사로하고 최종 수술의 끝에 바늘을 청소하십시오.
- 각 동물 간의 생리 인산염 버퍼 소독과 해밀턴 주사기를 씻고 린스.
- 2~5% 사이 isoflurane 세트와 isoflurane 유도 챔버에서 그들을 배치하여 생쥐를 마취.
- 전신 마취를 얻을되면 정상적인 체온을 유지하기 위해 밑에 따뜻한 패드와 부정사 위치에 챔버와 장소에서 마우스를 제거합니다.
- (적절한 마취를 유지하기 위해 필요한 1~3%에서 titrated) isoflurane 기화가 들어있는 노즐에서 동물의 주둥이를 배치하여 유지 보수 마취를 얻을 수 있습니다.
- 가위로 복부 피부를 면도.
- 수술하는 동안 배설물로 오염을 방지하기 위해 항문을 충당하기 위해 일회용, 살균 외과 드레이프를 사용하십시오.
- 외과 분야 (낮은 복부)를 충당하기 위해 두 번째 일회용, 살균 외과 드레이프를 사용하십시오.
- Betadine - 젖었 거즈 3 가지로 준비 복부. 이 단계를 세 번 반복합니다.
- 확대를위한 해부 현미경을 사용하여 가위로 더 낮은 복부 정중선 절개를합니다.
- 방광을 폭로.
- 방광이 가득 경우, 부분적으로 돔에서 완만한 하향 압력에 의해 그것을 압축 해제.
- 위쪽을 향하고 바늘의 베벨과 방광 돔 (교내 사출)의 벽에, 29 또는 30 게이지 바늘과 주사기를 사용하여 샘플 솔루션을 (최대 50 μL) 주사.
- 방광 벽에 샘플 솔루션을 주입하는 주사기의 플런저를 밀어. 잘화된 물집이 방광 벽에있는 세포의 성공적인 주입의 표시입니다.
- , 주사기를 제거 상처 클립으로 절개를 닫고 마우스가 온난 패드에 복구할 수 있습니다.
2. 대표 결과 :
누출 액을하지 않으며 크기의 안정 유지 잘화된 물집은 방광 벽 (그림 1)에 세포의 성공적인 주입의 표시입니다. Histological 분석은 방광 벽에 주입된 세포의 존재를 확인하기 위해 수행할 수 있습니다.
그림 1. 보여주기위한 인도 잉크를 사용하여 성공적인 방광 벽 주입의 예.
그림 2. 실험 절차의 도식.
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토론
마우스 방광 벽 주입은 방광 벽 정의된 영역에 특정 세포의 주입을 허용합니다. 이 기술은 방광 암, 부드러운 근육, 그리고 줄기 세포 생물학의 마우스 모델에 대한 다양한 응용 프로그램을하고 있습니다. 자신의 성장과 분화가 생리학 관련 해부학 맥락에서 공부를 할 수 있도록 정의함으로써, 마우스 방광 벽 주입은 orthotopic 위치에 방광 암 또는 줄기 세포의 도입을 용이하게합니다. 사실, Dinney 외. 첫 번째는 누드 생쥐 1 orthotopic 인간의 방광 암 xenografts를 공부하기 위해이 기술을 설명했다.
방광 벽 사출 기술이 방광 암, 줄기 세포 연구 1-9의 번호를 이용하고있는 동안, 그것은 사용할 수있는 유일한 방법은 아닙니다. 많은 과학자들은 피하, intraperitoneal, 또는 정맥 주사하여 누드 마우스로 방광 암 세포를 이식하려고 노력하지만, 이러한 모델은 예측 tumorigenicity 및 생체내...
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공개 사항
관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.
감사의 글
우리는 기꺼이 NIDDK에서 스탠포드 소아 연구 기금과 K08DK087895 - 01의 파일럿 부여의 지원을 인정합니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 시약의 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | |
| Isoflurane (Aerrane) | 백스터 | NDC 10019-773-60 | |
| 29 또는 30 게이지 바늘 | 해밀턴 | 7803-06 또는 7803-07 | |
| 100 microliter 주사기 | 해밀턴 | 7656-01 |
참고문헌
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