열 충격 방법을 사용 e. 대장균에 플라스미드 dna의 변화

Transformation of Plasmid DNA into E. coli Using the Heat Shock Method

열 충격 방법을 사용하여 E. 대장균에 플라스미드 DNA의 변화 분자 생물학의 기본 기술입니다. 그것은 박테리아에 외국 플라스미드 또는 결합 제품을 삽입 구성되어 있습니다. 이 비디오 프로토콜은 Genlantis에서 상용 화학적으로 유능한 박테리아를 사용하여 변화의 전통적인 방법을 설명합니다. 얼음에 짧은 부화 후, 화학적 능력 박테리아와 DNA의 혼합물은 45 초 동안 42 ° C에 배치됩니다 (열충격) 후 얼음에 다시 배치. SOC 미디어가 추가되고 변형 세포 ° C 30 분 교반과 함께 37 incubated 수 있습니다. 관계없이 변환 효율의 식민지를 고립을 보장하기 위해서, 변형 박테리아의 두 수량은 도금 있습니다. 이것은 전통적인 프로토콜은 대부분의 상용 유능한 박테리아를 변환하기 위해 성공적으로 사용될 수 있습니다. Genlantis에서 turbocells이 설명서에 설명된 소설 3 분 변환 프로토콜에도 사용할 수 있습니다.

열 충격 방법을 사용 E. 대장균에 플라스미드 DNA의 변화

열충격법(heat shock method)을 이용한 E. coli 내 플라스미드 DNA 형질전환은 분자생물학의 기초 기술입니다. 이는 외래 ...

안녕하세요, 저는 Alex Hoge입니다. 저는 캘리포니아 대학교 어바인 캠퍼스 생리학 및 생물물리학과의 gym Hall 연구실에서 근무하고 있습니다. 오늘은 전기 천공법(electroporation)을 이용해 전기적 컴피턴트(electrically competent) E. coli를 형질전환하는 방법을 보여드리겠습니다.오늘은 제브라피쉬의 전체 마운트 면역형광염색(whole mount immunization) 실험을 위한 프로브 제작을 위해, 라이게이션 산물을 이용해 대장균(coli)을 형질전환시키는 기술을 사용하겠습니다. 이제 형질전환을 시작하겠습니다. 우선 항온수조(water bath) 또는 드라이 배스(dry bath)를 42 °C로 설정해야 합니다.메인 배양액에서 막 꺼낸 박테리아를 얼음 위에 두어야 합니다. 오늘은 시판되는 전기 천공 능력을 가진 컴피턴스 셀과 얼음 위에 둔 DNA를 사용합니다. 또한 실온 또는 37°C로 유지한 SOC 배지가 든 튜브와 항생제가 포함된 LB 배지 플레이트가 필요합니다.이제 박테리아에 DNA를 첨가하겠습니다. 박테리아의 오염을 방지하기 위해 화염 옆에서 작업하겠습니다. 박테리아가 포함된 용액을 첨가합니다.박테리아 50 µL를 넣은 후 즉시 다시 얼음에 넣습니다. 박테리아와 DNA가 섞이도록 가볍게 튕겨준 다음, 얼음 위에서 최대 15분 동안 둡니다. 이제 15분이 지났으므로, 박테리아를 42 °C에서 45초 동안 처리하는 히트 쇼크(heat shock)를 수행할 준비가 되었습니다. 튜브를 얼음에서 꺼내 즉시 42 °C 설정 장치에 넣고 타이머를 45초로 맞춥니다. 그 다음 매우 빠르게 다시 얼음에 넣어, 42 °C에서 즉시 얼음 위로 옮깁니다.그런 다음 2분 동안 기다립니다. 이제 박테리아에 SOC 배지를 첨가하고 37°C에서 30분 동안 배양하겠습니다. SOC 배지 500 µL를 취해 박테리아에 넣고, 임시로 만든 작은 챔버에 넣습니다.따라서 인큐베이터로 eend 튜브와 임시 챔버를 사용할 경우, eend 튜브를 수평으로 놓아야 더 효율적으로 흔들어 섞을 수 있습니다. 이제 튜브를 셰이커에 넣을 준비가 되었습니다. 그렇기 때문에 37 °C의 소형 챔버에서 30분 동안 보관하는 것입니다.이제 37°C에서의 배양을 마쳤으며, 항생제가 첨가된 lb 배지에 박테리아를 도말하겠습니다. 제 경우에는 chloral을 사용합니다. 각 샘플에서 50 µL를 취하여 플레이트에 접종합니다

열 충격 방법을 사용 E. 대장균에 플라스미드 DNA의 변화

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