인간 신경 줄기 세포를 계산

Summary

가능한 세포의 정확한 수를 지식은 많은 조직 문화 조작이 필요합니다. 이 프로토콜은 살고 죽은 세포 사이의 차별과 hemacytometer를 사용하여 세포를 계량하는 방법에 대해 설명합니다. 그것이 인간의 신경 줄기 / 전구체 세포 (hNSPCs)를 계산 설명하지만, 그것은 다른 세포 유형에 사용할 수 있습니다.

Abstract

세포 현탁액의 주어진 볼륨에서 가능한 세포의 정확한 개수의 지식은 이러한 immunocytochemistry 또는 셀 transfections에 대한 도금 세포 많은 일상적인 조직 문화의 조작을 위해 필요합니다. 이 프로토콜은 살고 죽은 세포 사이의 차별과 세포 농도와 hemacytometer를 사용하여 전체 휴대폰 번호를 quantifying 위해 간단하고 빠른 방법을 설명합니다. 이 절차는 먼저 성장 표면에서 세포를 분리 및 미디어에서 그들을 resuspending 필요합니다. 다음, 전지 Trypan 파랑 (이상 사분면마다 20-50 세포를 줄 수있는 농도)의 용액에 희석하여 hemacytometer에 배치됩니다. 마지막으로, 한 1mm ² 사분면 (0.1 μl)와 희석 계수 곱한의 볼륨에 의해 평균 나누어 여러 무작위로 선택된 quadrants에서 가능한 세포의 수를 평균하면 나도 당 세포의 숫자를 제공합니다 μl의 전체 볼륨을하여 세포 농도를 곱한하면 전체 휴대폰 번호를 제공합니다. 이 프로토콜은 인간의 신경 줄기 / 전구체 세포 (hNSPCs)를 계산 설명뿐만 아니라, 많은 다른 세포 유형에 사용할 수 있습니다.

Protocol

인간 신경 줄기 세포를 Passaging

참고 : 참조하십시오 Passaging 인간 신경 줄기 세포의 세포를 분리하고 resuspend하는 방법에 대한 기사. https://www.jove.com/index/Details.stp?ID=263

카운팅에 대한 세포 현탁액을 준비

1. 0.4 % Trypan 블루 솔루션과 eppendorf 튜브에 세포 미디어 20 μl 장소 25 μl.
2. 부드럽게 동질적인 중지를 만드는 미디어 알려진 볼륨에있는 세포가 들어있는 튜브를 감청하여 계산하는 세포를 Resuspend. eppendorf 튜브 이전 단계에서 세포로의 5 μl를 놓습니다. 이 단계는 10의 요인에 의해 세포 농도 dilutes.
3. hemacytometer에 덮개 유리를 삽입하고, 세포 현탁액의 11-12 μl에 대한로드합니다.
   
   

Discussion

이 프로토콜은 세포를 포함하는 실험의 다양한 세포 농도를 결정하기 위해 간단한 신속한 방법을 설명합니다. 3D에서 설명하는 바로 가기를 사용하여, 하나는 신속하고 정확하게 세포 농도와 주어진 볼륨에서 전체 휴대폰 번호를 확인할 수 있습니다.

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Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
위상차 혈구계	도구	Hausser Scientific	02-671-54	표시된 카탈로그 #
Trypan Blue Stain 0.4%	Reagent	GIBCO, by Life Technologies	15250-061	표시된 카탈로그에 따라 Fisher에서