방법 논문

ECG의 심장병 위험의 지표의 평가, 그리고 쥐의 Aconitine 유발 Arrhythmias을 느끼기 쉬운 상태에 대한 방법은 상태 Epilepticus을 따라

DOI:

10.3791/2726

⸱

2011년 4월 5일

 ,  , 
1Department of Pharmacology and Toxicology, University of Utah

이 논문에서

요약

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심전도 (ECG)에 의해 심장의 전기 활동을 측정하고, 쥐의 상태 epilepticus (SE) 다음과 같은 심장병 위험 요인과 arrhythmias을 느끼기 쉬운 상태의 분석에 대한 기술이 설명되어 있습니다.

초록

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치명적인 심장 arrhythmias은 병적인 조건 수가 사망률에 기여한다. 비침습 쉽게 얻은 심전도 (ECG)에서 얻은 몇 가지 매개 변수가 설립 cardiomyopathies의 번호에서 고통 환자 심장병 위험 전조 지표를 잘 확인하고 있습니다. 증가 심장 박동이 심장 박동의 변화 (HRV)를 감소, 모든 향상된 심장 위험 1-4 나타내는 아르 기간 및 심장 심실 전기 활동의 다양성을 (QT 간격) 증가했다. 동물 모델에서, 그것은 실험적으로 유도된 arrhythmias 이러한 ECG - 파생 변수와 자화율을 비교하는 가치가있다. arrhythmogenic 에이전트 aconitine의 정맥 주입은 널리 운동 7 대기 오염 물질 8 노출뿐만 아니라, antiarrhythmic 결정 다음, 우울증 5 고혈압 6 동물 모델을 포함하여 실험 조건의 범위에서 arrhythmias을 느끼기 쉬운 상태를 평가하기 위해 사용되었습니다 약리 대리인 9,10의 효능.

그것은 인간 QT 분산은 표준 12 리드 ECG에서 리드의 전체 집합 전체 QT 간격의 변화를 측정하는 것을 주목하여야한다. 따라서,이 프로토콜에 설명된 쥐에서 2 리드 ECG에서 QT 분산의 측정은 인간의 ECG 기록으로부터 계산보다 다릅니다. 이것은 인간의 임상 의학에 설치류에서 얻은 데이터의 번역에 한계를 나타냅니다.

상태 epilepticus (SE)은 13 가지 경우 20 % 이상의 사망률 30 분 11,12 11,12, 그리고 결과를 지속 지속적으로 반복 발작의 단일 발작 또는 시리즈입니다. 많은 개인은 SE 생존하지만, 삼십일 14,15 이내에 죽어. 이 지연 사망률의 메커니즘 (들)은 완전히 이해되지 않습니다. 이것은 치명적인 심실 arrhythmias이 죽음 14-17 많은 기여 것을 제안했습니다. SE뿐만 아니라, 저절로 반복 발작, 즉 간질을 경험 환자는 간질 (SUDEP) 18과 관련된 조기 갑자기 예기치 않은 죽음의 위험이 있습니다. SE와 마찬가지로, SUDEP을 중재 정확한 메커니즘은 알려져 있지 않습니다. 이것은 심실 이상과 결과 arrhythmias가 중요한 공헌 18-22을 만드는 것이 제안되었습니다.

발작과 관련된 심장 죽음과 cardioprotective 요법의 효능의 메커니즘을 조사하기 위해서는 위험 ECG - 파생 지표를 모두 취득하고 발작 장애 23-25의 동물 모델에서 심장 arrhythmias을 느끼기 쉬운 상태를 평가하는 것이 필요합니다. 여기 SE, 수집과 분석 ECG 레코딩, 그리고 aconitine의 IV 주입하는 동안 arrhythmias의 유도에 따라 스프 라그 - 돌리 실험실 쥐 (Rattus norvegicus)의 ECG 전극을 이온 주입에 대한 방법을 설명합니다.

이러한 절차를 직접 사이의 관계를 결정하는 데 사용할 수있는 ECG - 파생 발작 질환의 쥐 모델에서 심실 arrhythmias에 심장 전기 활동과 자화율 조치, 또는 갑작스런 심장 사망의 증가 위험과 관련된 병리학합니다.

프로토콜

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1. 건설 재료

  1. 경정맥 정맥 카테 테르를 한 끝에 beveled PE - 50 폴리에틸렌 튜빙의 조각 (100 ㎜)에서 구축하고 헤파린 식염수 (50 U 헤파린 / ML 호수)로 가득 차 있습니다.
  2. ECG 기록 전극은 절연 실버 와이어 (30AWG)의 두 100mm 길이로 구성되어 있습니다. 두 전선의 한쪽 끝을는 옷을 벗긴 채 microconnector에 납땜하고 절연은 접지로 사용됩니다 삼분의 일 전선을 형성 트위스트입니다. 절연의 다섯 - mm은 전선의 말초 끝에서 제거하고 삭제합니다.

2. 경정맥 베인 카테터를 이온 주입

  1. 우레탄의 관리에 의해 동물, IP를 (1.2 g / kg) 마취.
  2. 정기적으로 페달 탈퇴 응답 및 / 또는 안구 반사를 평가하여 (10 분 간격) 마취의 심도를 확인하십시오. 필요한 경우 마취를 보완.
    3. 후, 쇄골에서 턱에 목의 오른쪽 면도.
  3. 경동맥 위의 피부에 세로 절개 (10~15mm)을 확인하고 절개를 엽니다.
  4. 무딘 절개 기법을 사용하여 오른쪽 경정맥 정맥을 찾아 분리 기본 근육을 전파.
  5. 경정맥 정맥에 따라 플레이스 수술 비단 두 조각 (# 2)와 절개의 주동이의와 꼬리 부분에 대부분의 위치에 봉합합니다. 정맥을 통해 흐름을 중지할 수있는 주동이의 끈을 묶어.
  6. 기본 조직에서 혈관을 들고 작은 상처를 확인하기 위해 꼬리 묶인을 철회. 다음 헤파린 - 가득한 (50 U / ML 호수) PE - 50 폴리에틸렌 카테터 (길이 100mm)의 beveled 끝을 삽입하고 오른쪽 아트리움의 수준에 대한 팁을 약 8mm를 사전.
    7. 위해, 선박 및 카테 테르 모두 주변의 꼬리 묶인를 묶어. 마지막으로, 상처 클립이나 봉합사 중으로 상처를 닫습니다.
  7. 카테 테르의 주입 동안 노출된 끝을 중 hemostat로 고정되어 또는 사전 주입 펌프에 부착하기 위해 혈액의 흐름을 방지하기 위해 다시 연결합니다.

3. CG의 전극을 이온 주입

  1. 의 뒷면에있는 동물을 플레이스와 가슴 면도.
  2. 전극의 배치에 대한 두 개의 세로 incisions (≈ 10mm), 오른쪽 상단에 하나 가슴의 왼쪽 하단 quadrants 한과 흉부 근육을 노출 무료 overlying 피부합니다.
  3. 봉합사 노출 영역의 각 흉부 근육에 은색 와이어 전극의 노출 5 mm 팁 중 하나 subcutaneously 접지 전극을 배치.
  4. 상처 클립 incisions을 닫고 녹음 장치에 microconnector를 꽂습니다.
  5. 절차를 수행하는 동안 체온을 유지하기 위해 수건을 느슨하게 동물을 바꿈.

4. 녹음 ECG

  1. 녹음 Powerlab 데이터 수집 시스템 및 Macintosh 컴퓨터 또는 유사한 하드웨어 / 소프트웨어 (; 필터링, 1에서 1,000 사이 Hz에서, 50X 증폭)를 사용하여 만들어집니다.
  2. 20 분 20-30 분 평균 기간, 기록 ECG를 따라.

5. 심실 Arrhythmias를 유도

  1. 프로그램 주입 펌프에 배치 원격 주사기로 경정맥 정맥 카테터를 연결합니다.
  2. 5 UG / 7 분 ㎏ / 분 지속적인 복용을 제공하는 속도 aconitine 주입을 개시.
  3. 다음과 심실세동 또는 주입 기간의 끝은 승인 절차를 사용하여 동물을 안락사.

6. ECG 분석

  1. QT 간격은 심실 전기 활동의 총 시간을 나타냅니다. 그림. 1 모델 ECG 기록과 QT 간격의 시간을 보여줍니다. 20 분 녹음 기간 동안 얻은 다섯 분 간격 전역 기록된 심장이 뛰는에 대한 T - 파도의 Q - 파 및 종료의 개시 사이의 말은 시간을 계산합니다.
  2. 심장 박동 (QTc)의 차이에 대한 QT 간격을 수정하려면 바젯의 공식을 사용 QTc = QT / (RR) ½ 어디 RR은 심장이 뛰는 사이의 평균 간격입니다. RR 간격은 분석 기간 동안 얻은 연속 Q - 파도 사이의 기간으로 계산됩니다.
  3. QT 분산 (QTd)는 각 동물에 대해 기록된 최대 QT에서 최소 QT을 빼서 계산합니다.

7. 심장 박동의 변화 분석

소프트웨어 프로그램 (예 : LabChart 7 ADInstruments 주식 회사)는 심장 박동의 시간적 및 / 또는 스펙트럼 모두 변화의 자동 계산에 사용됩니다.

8. 심실 Arrhythmias에 자화율 분석

첫 번째 조기 심실 수축 (PVC, 그림. 2, 패널 1), 심실빈맥 이라는데요 (VT, 그림, 2, 패널 2) 심실 세동 (VF, 그림 2. 패널 3 aconitine 주입의 개시에서 대기 시간을 계산 ).

9. 대표 결과

그림. 3 제어 쥐 및 사전 테스트로 일주 SE를 받았습니다 동물의 스펙트럼 도메인 (루트는 RR 간격의 표준 편차의 제곱 뜻 RMSSD)에 HRV 중 하나 측정을 보여줍니다. 심장 기능의 parasympathetic 컨트롤의 변경을 나타냅니다 HRV의 측정, 26, 크게 상태 epilepticus에 따라 동물의 감소이다. 그림. 모두 수정 QT 간격 (QTc, 패널 A)과 QT 분산은 (QTd, 패널 B) 크게 이주 증가하는 네 쇼 SE에 따라 27. 함께 촬영이 데이터는 SE는 심실 arrhythmias의 위험을 증가시킬 수있다는 것을 예측했다. 이 예측은 이러한 연구에서 관찰 실험 arrhythmias를 (PVC, VT, VF) 유도하는 데 필요한 aconitine 주입의 기간은 다음과 동물 SE 크게 작게다고 연구 결과에 의해 확인된다 (그림 5) 27.

그림 1. 모델 ECG 녹음. QT 간격은 점선 라인 사이의 시간 계산됩니다.

그림 2. 패널 1) 너무 빨리 심실​​ 수축 (PVCs)은 고립되어 정상적인 심장이 뛰는 사이에 발생하는 심실의 수축 (B) (A). PVC 레코딩은 P와 T 파도의 부재가 특징입니다. 패널이 다량의 강심 (VT)은없고 개입 정상 심장이 뛰는 (A)과 함께 발생하는 여러 심실의 수축이 일련의 (C)입니다. 패널 3 심실세동 (VF)은 뚜렷한 리듬 및 QRS와 P 파도 (D) 사이에 협회의 부족이다.

그림 3. 루트는 표준 편차 (밀리초 RMSSD)의 제곱 의미합니다. ** P <0.01가 컨트롤에 비해.

그림 4. QT 간격 (패널 A) 및 제어 동물 (컨트)에서하고 테스트하기 전에 상태 epilepticus (SE) 2 주 겪고 쥐에서 얻은 ECG 녹음으로부터 계산 QT 분산을 (패널 B) 수정 의미합니다. * P <0.05는 컨트에 비해. (멧켈프, 외., 암. J. Physiol. 심장과 서크, 2009의 허가와 함께 사용 Physiol 소크, 오전 27).

그림 5. 대기 시간 (초) 테스트합니다. * P <0.05, ** P <0.01가 컨트에 비해. (멧켈프, 외., 암. J. Physiol. 심장과 서크, 2009의 허가와 함께 사용 Physiol 소크, 오전 27).

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토론

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설명 절차의 두 측면은 매우 중요합니다. 첫째, 심장으로 aconitine 행정의 비율은 동물에 걸쳐 동일해야합니다. 이것은 마음에 상대적으로 경정맥 정맥 카테 테르 팁의 일관된 배치 및 주입 속도에주의 조정이 필요합니다. 마음을 aconitine 전달의 속도는 적절하게 변경 자화율에 비해 심실 arrhythmias의 증상을 평가하기 위해서는 동일해야합니다. aconitine 배달 다릅니다면 arrhythmias에게 지연 심장 기능의 약물 농도의 차이가 아니라 변경으로 인해 발생했을 수 있습니다. 둘째, 준비 및 ECG 기록 전극의 배치 분명 뚜렷한 P, QRS, 그리고 T 파도와 함께 유물을 무료 녹음를 얻을 수 있어야합니다. 심실 arrhythmias의 심장 박동, HRV, 그리고 사건이 혼자 QRS 파에서 결정할 수 있지만, QTc 및 QTd는 명확 Q - 파의 발병하고, T - 파도 종료를 포함하는 기록으로부터 계산해야합니다.

이러한 기술 중 하나는 분명 한계는 그들이...

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공개 사항

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우리는 공개 없어요.

감사의 글

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이 연구는 SLB에 간질 (치료)의 연구에 대한 시민 연합에서 부여에 의해 지원되었다.

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참고문헌

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