Poliovirus 식별을위한 입자 응집 방법

요약

바이러스 수용체 분자를 이용한 최근에 개발된 새로운 입자 응집 (PA) 분석은 poliovirus (PV)의 신속하고 쉬운 식별을 허용했다. 이 문서에서는, 우리는 PV 식별을 위해 PA 분석을위한 절차를 표시합니다.

초록

세계 소아 마비 박멸 이니셔티브에서 실험실 진단 급성 이완된 마비 (AFP) 가지 경우 대변 샘플에서 PV를 분리하고 식별하여 중요한 역할을한다. 세계 보건기구 (WHO)의 글로벌 소아 마비 실험실 네트워크, PV 고립과 신원은 현재 각각 세포 배양 시스템 및 실시간 RT - PCR을 사용하여 수행되고있다. PV의 포스트 박멸의 시대에, 간단하고 신속한 식별 절차는 국가 실험실에서 소아 마비 가지 경우 신속한 확인 도움이 될 것입니다. 현재 연구에서 우리는 PV 식별용으로 개발된 새로운 PA 분석의 절차를 표시합니다. 이 PA의 분석은 PV 수용체 (PVR) 분자와 PV의 모든 serotypes에 구체적이고 균일 친화력이다 virion의 상호 작용을 활용합니다. 절차는 간단합니다 (반응 판에 한 단계 절차)와 빠른 (결과는 반응 2 H 내에서 얻을 수있다), 그리고 그 결과는 시각 (젤라틴 입자 응집의 관찰) 관찰합니다.

프로토콜

1. 유지 보수 매체의 준비 (MM) 및 성장 매체 (GM)

MM과 GM의 준비, ¹ 소아 마비 실험실 설명서를 참조하십시오. Dulbecco의 수정된 이글 배지 (DMEM)는 2퍼센트 소태아 혈청 (FCS)와 FCS가 각각 MM 및 GM의 대체로서 사용될 수 10 % 보충.

2. 안티 PV 항체의 준비

1. 안티 PV 항체 (타입 1, 2, 또는 3)의 각 유리병에 물 (유리병 당 0.5 ML)를 추가하여 Reconstitute 방지 PV 항체 (RIVM PV 입력 항혈청). 별도의 표시 튜브에 MM 4.5 ML이 재구성 항체 솔루션 (0.5 ML 각)를 추가합니다.
   참고 : 안티 PV 항체 중 일부는 많은가 재구성 양식 (유리병 당 0.5 ML)로 제공됩니다. 안티 PV 항체의 같은 많은, reconstitution을위한 물 또한 필요하지 않습니다.
2. 재구성 방지 PV 항체의 동일한 음량을 섞는다. 에 대한 안티 PV1 2, 2 3, 또는 3 +1 : 혼합 각 재구성 항체의 1.8 ML (각 조합에 대해 1.8 ML + 1.8 ML = 3.6 ML). 에 대한 안티 PV1 2 세 : 혼합 각 재구성 항체 1.2 ML (1.2 ML....

토론

이 PA의 분석의 독특한 점은 PV 2의 검출을위한 안티 - PV 항체 대신 PVR 분자의 활용이다. 이것은 PV ^3-6의 세 serotypes에 균일 친화력과 PV와 sensitized 젤라틴 입자의 구체적인 상호 작용을 허용합니다. PVR의 monomeric 형태 virion에서 단일 바인딩 사이트에만 중간 동질성 ^{(~ -8} M 10 ^-7의 해리 상수) ^7을 가지고 있기 때문에 ^우리는, 젤라틴 입자의 sensitization에 대한 PVR의 immunoadhesin 양식을 (PVR - IgG2a) 사용 ^8, 성공적으로 PV의 격리와 sensitized 젤라틴 입자의 특정 응집을 관찰했다. 높은 특이성과 sensitized 입자의 균일 친화력으로 PA 분석의 PV 식별의 중요한 요인은 바이러스 titer (PA 분석하여 PV의 유효 감지)과 2) 응집의 해석 (PV의 정확한 식별을위한)) 일아르 .

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
시약의 이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Sensitized - 젤라틴 입자	Fujirebio 주식 회사		테스트 키트
Reconstitution 버퍼	Fujirebio 주식 회사		테스트 키트
Microtitration 플레이트	Fujirebio 주식 회사		테스트 키트
안티 PV 항체	RIVM