우리는 처리 방법을 설명하고 화면의 필드 수집 베로 세포 배양 분석에 의해 바이러스의 다양성을 위해 모기. 이 기술을 채용함으로써, 우리는 코네티컷에서 수집한 모기 4 taxonomic 가정에서 9 가지 바이러스를 감지했습니다.
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이 논문에서
요약
초록
모기는 웨스트 나일 바이러스, 뎅그열 바이러스 및 chickungunya 바이러스와 같은 중요한 인간 병원균을 포함하여 별개의 바이러스의 숫자를 전송. 이 바이러스의 대부분은 자신의 발병 범위의 강화와 새로운 영역을 확장, 이러한 위협에 대응하는 효과적인 감시 및 제어 프로그램을 necessitating 있습니다. 바이러스 활동을 모니터링하는 한 가지 전략은 발병 사이트 모기의 대규모 번호를 수집하고 바이러스 감염을 테스트 포함됩니다. 이 문서에서는, 우리는 처리하는 방법을 과정을 설명하고, 베로 세포 배양 분석하여 전염성 바이러스에 모기를 현장 수집 화면. 모기가 트랩 위치와 수종별로 분류하고, ≤ 50 개인가 들어있는 수영장으로 분류됩니다. 풀링 표본은 믹서 - 공장 및 수성 단계가 합류 베로 세포 배양 (복제 E6)에 주사됩니다를 사용하여 버퍼 호수에 균질하고 있습니다. 세포 배양은 3-7 이후 접종 및 세포 배양 재배 바이러스가 적절한 진단 assays에 의해 식별됩니다 시절부터 cytopathic 효과에 대한 모니터링입니다. 이 방법을 이용하여, 우리는 코네티컷, 미국에서 수집한 모기에서 9 가지 바이러스를 격리 있고,이 중에서 5 인간의 질병을 일으키는 것으로 알려져 있습니다. 이러한 바이러스의 세 (웨스트 나일 바이러스, 포토 바이러스와 라 크로스 바이러스) 북미 또는 1999 년 이후 뉴잉글랜드 지역에 대한 새로운 기록을 나타냅니다. 바이러스의 광범위한 다양성을 감지하는 능력은 모두 모기가 인구에 설립하고 최근 새로운 바이러스 모니터링하는 것이 중요합니다.
프로토콜
1. 모기 분류 및 식별
- 다음 절차는 라이브 모기와 함께 작동하도록 훈련 직원 전용 biosafety 레벨 2 (BSL - 2) 실험실에서 열린 실험실 벤치에서 수행됩니다. "차가운 체인은"절차를 통해 유지됩니다.
- 5 분 -20 °의 냉장고 안에 모기 수집 봉투를 배치하여 성인 모기에 살고 마취. 드라이 아이스가 들어있는 절연 컨테이너로 전송 수거 봉투. 뚜껑을 닫고 노크 다운 완료 확인으로 1-3 분 탄소 이산화탄소로 모기를 노출.
- 드라이 아이스의 침대에 배치 미리 차게 냄비에 anesthetized 모기를 누릅니다. 좋은 포셉 및 플라스틱 부분 컵에서 개최를 사용하여 별도의 개별 여성 모기. 서부 유럽 표준시 얼음 덮개 및 장소 컵을 함께 커버.
- 스테레오 해부 현미경 (10 - 60X 줌)의 도움으로 외부 모기 형태에 따라 설명 taxonomic 키를 사용하여 수종으로 모기를 적어 전자 진정 테이블에 장착.
- 구리 BB를 포함하는 두 ML 스냅 캡 튜브 안에 ≤ 50 개인 수영장에 모기 종을 확인 결합합니다. 튜브는 고유 식별자로 표시됩니다.
- 모든 모기의 식별 다음, 유리병이 표시 봉지에 배치하고 드라이 아이스가 들어있는 스티로폼 쿨러에서 개최.
- 바이러스 검사 전....
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토론
베로 세포 배양 분석은 바이러스의 다양성을위한 화면 필드 수집 모기에 효과적인 방법으로 제공하고 있습니다. 이것은 구체적으로 목표 하나 또는 관심있는 몇 가지 바이러스 분자 방법 대조를 이룹니다. 또한, 우리는 베로 세포 배양 분석이 똑같이 RT - PCR 7보다 민감한 경우가 아니므로 미래 연구를위한 참조 컬렉션에 저장된 바이러스 격리 우리에게 제공하는 것으로 나타났습니다. 그럼에도 불구하고, 세포 배양 시스템은 많은 경우에 적합하지 않을 수 있습니다. 이러한 접근 방식은 추가적인 비용과 BSL - 3 실험실에서 바이러스를 성장하는 데 필요한 훈련을 incurs 있지만, 이러한 비용은 세포 배양에 대해 상대적으로 저렴한 공급에 의해 상쇄 수 있습니다. 그것은 또한 대부분의 전부는 아니지만 모기가 전파되는 바이러스가 베로 세포 배양 9,10의 CPE를 생산 협조할 것입니다. 뎅그열 바이러스는 다른 진단 검사에 의해 검사를해야 하나 주목할만한 예외입니다. 이상적으로, 분자 및 세포 모두 문.......
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공개 사항
관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.
감사의 글
우리는 기꺼이 DRS의 중요한 기여를 인정합니다. 존 앤더슨, 앤드류 메인이 공부 셜리 티렐. 이 작품은 질병 통제 및 예방 (U50/CCU116806-01-1)와 농업의 미국학과 (58-6615-1-218, CONH00768 및 CONH00773)의 센터에서 교부금에 의해 부분적으로 지원되었다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 시약 / 장비 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | |
| 태아 소 혈청 | Gibco - Invitrogen | 16,140 | |
| Anti-biotic/mycotic | Gibco - Invitrogen | 15,240 | |
| 나트륨 중탄산염 NaHCO 3, 7.5 % Soln. | Gibco - Invitrogen | 25,080 | |
| L - 글루타민 200mM 100x | Gibco - Invitrogen | 25,030 | |
| 가루 최소한의 필수적인 매체 (멤) | Gibco - Invitrogen | 11,700 | |
| 10X Dulbecco의 PBS | Gibco - Invitrogen | 14,080 | |
| 트립신 - EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) | Gibco - Invitrogen | 15,400 | |
| 토끼 혈청 | Gibco - Invitrogen | 16,120 | |
| 베로 세포 (클론 E6) | ATCC | CRL - 1586 | |
| 작은 조직 문화 flasks, 통풍 모자, 25cm이 | 팔콘 - 백톤 디킨슨 | 353112 | |
| 대형 조직 문화 flasks, 통풍 모자, 175cm 2 | 팔콘 - 백톤 디킨슨 | 353108 | |
| 구리 코팅 BB의 4.5 mm | Crosman | 0767 | |
| 믹서 밀 | Retsch | MM300 | |
| Isopack 냉동기 랙에 | Eppendorf | 022510240 |
참고문헌
- Chosewood, L. C., Wilson, D. E. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. , 5 edn, U.S. Government Printing Office. (2007).
- Anderson, J. F. Isolation of West Nile virus from mosquitoes, crows, and a Cooper's hawk in Connecticut. Science. 286, 2331-2333 ....
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재인쇄 및 허가
