플랫폼 재배치를 통한 물 미로: 작업 기억을 평가하는 방법

초록

출처: Hausser, N., et al. 외상성 뇌 손상 후 쥐의 행동 결핍 감지.J. Vis. 특급 (2018).

이 비디오에서는 설치류의 작업 기억을 연구하는 데 사용되는 탐색 작업인 플랫폼 재배치를 사용한 Morris 물 미로 테스트에 대해 설명합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 작업 기억 물 미로

1. 설비
   1. 28cm 높이까지 물을 채우고 26 ± 1 °C로 유지 관리하는 탱크를 사용하십시오.
   2. 높이 26cm의 스탠드에 직경 10cm의 투명 아크릴 유리 플랫폼을 사용하십시오.
      메모: 플랫폼의 상단 표면은 X가 가로질러 있는 원 모양의 실리콘으로 코팅되어야 합니다. 이것은 쥐가 플랫폼 위로 올라갈 수 있게 하고 견인력을 제공하여 미끄러지지 않도록 합니다.
   3. 스톱워치, 열 램프, 일회용 수건, 흡수 패드, 여분의 케이지, 작고 긴 손잡이가 있는 수족관 어망을 준비하세요. 비디오 카메라에 연결된 컴퓨터 비디오 추적 시스템을 사용하여 쥐가 수영하는 것을 기록하고 데이터를 컴퓨터로 보냅니다. 나중에 분석할 수 있도록 비디오와 데이터를 컴퓨터에 저장합니다.
2. 작업 기억 물 미로 테스트
   1. 랫트에게 5일 연속 동안 매일 4쌍의 실험을 제공하고, 4개의 사분면 각각에 플랫폼을 배치하고, 아래에 설명된 대로 4개의 시작점(N, S, E, W) 각각에서 랫을 시작합니다.
   2. 먼저 실험 전체에서 사용할 시작 위치-플랫폼 쌍을 정의합니다.
      참고: 플랫폼이 위치한 사분면의 순서와 사용된 시작 지점은 5일 동안 수영하는 날마다 다른 순서여야 하지만 각 쥐마다 동일해야 합니다.
      1. 4개의 시작점(N, S, E 또는 W)과 4개의 플랫폼 위치(사분면 1, 2, 3 또는 4; 그림 1). 예를 들어, (N, 2; E, 4; 에스, 1; 여, 3; 그림 1 참조). 시작 지점이 플랫폼에 너무 가깝지 않도록 균형 잡힌 순서(무작위가 아님)를 계획합니다(시작 지점은 플랫폼 위치와 동일한 사분면이 아님). 플랫폼 사분면과 4개의 시작점을 사용하여 데이터 시트를 설정합니다.
      2. 쥐가 수영하는 것을 비디오로 촬영하고 지정된 데이터(예: 수영 시간, 속도, 플랫폼을 찾기 전에 이동한 거리)를 수집하는 데 사용할 비디오 추적 소프트웨어에 대한 프로토콜을 작성합니다.
         메모: 추적 소프트웨어는 지정된 시간이 지나면 자동으로 녹음을 중지합니다. 프로토콜은 플랫폼이 배치되는 위치, 동물당 실행할 시도 수, 세션당 테스트할 동물 수, 허용되는 최대 기간(예: 120초)을 지정할 수 있어야 합니다.
      3. 세션당 4-6마리의 쥐를 테스트합니다.
         메모: 6마리 이상의 랫트는 랫트 사이의 타이밍에 문제를 일으키고 핸들러에 의한 오류로 이어질 수 있습니다. 보온 상자도 붐비게 됩니다.
   3. 트라이얼 1
      1. 비디오 추적 소프트웨어를 열고 물 미로 지도를 포함한 올바른 프로토콜을 로드합니다.
      2. 지정된 위치(예: 2; 그림 1) 소프트웨어의 맵과 일치하는지 확인합니다. 쥐가 비디오 카메라의 시야에 들어갈 때 시작하도록 추적 소프트웨어를 준비합니다.
      3. 지정된 위치(예: N; 그림 1) 즉시 타이머를 시작합니다.
      4. 쥐 120초가 플랫폼을 찾도록 합니다. 쥐가 플랫폼을 찾으면 타이머를 중지하고 워크시트에 시간을 기록합니다. 쥐가 플랫폼을 찾지 못하면 손으로 플랫폼으로 이끌고 120초를 기록합니다. 쥐 15초가 플랫폼에 남아 있도록 합니다.
   4. 트라이얼 2
      1. 소프트웨어가 평가판 2를 사용할 준비가 되었는지 확인합니다. 쥐를 같은 시작 위치(N)의 탱크에 다시 놓습니다. 1.2.3.4단계를 반복합니다.
   5. 시험 2 후, 가열된 인클로저에 쥐를 4분 동안 놓고 플랫폼을 두 번째 위치(4; 그림 1)을 선택하고 소프트웨어의 맵과 일치하는지 확인합니다.
   6. 4개의 시작 위치/승강장 쌍이 모두 완료될 때까지 시험 1 및 2 절차(단계 1.2.3–1.2.4)를 반복합니다.

결과

그림 1. 물 미로의 다이어그램.이 다이어그램은 작업 기억 Morris 물 미로의 가능한 플랫폼 위치(1, 2, 3, 4)와 시작점(N, S, E, W)을 보여줍니다. 쥐는 각 시작 위치/플랫폼 페어링에서 두 번의 시도가 허용됩니다. 15초의 재판 간 간격과 보온 챔버에서 4분의 휴식이 있으며, 각 일일 세션마다 총 4쌍의 재판

이 있습니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Sprague-Dawley 쥐	찰스 리버스 연구소	CD-IGS 쥐 변형 코드 001	남성 알비노 300-350g 도착
유리 섬유 수영장	제조사 불명		직경 72인치 x 깊이 30인치(~ 500갤런)
플렉시글라스 플랫폼	매기 파슬리(Maggie Parsley)의 핸드메이드		직경 10cm, 높이 26인치, 그립 표면을 제공하기 위해 플랫폼 표면에 실리콘이 도포
플렉시 유리 동물 상자 (뚜껑 포함)	UTMB 기계 공장		2 상자 10 "w x 16"L x 9 "h
스포트라이트/히트램프	홈 디포		3 수영장 주변 2 동물을 말리는 상자
애니메이즈	샌디에이고 인스트루먼트	9001	http://www.sandiegoinstruments.com/any-maze-video-tracking/