종양에서 오가노이드 준비: 3D 체외 종양 모델

초록

출처: Wadosky, K. M., et al. 전립선암의 유전자 조작 마우스 모델에서 종양 오가노이드 생성. J. Vis. 특급 (2019).

종양에서 유래한 오가노이드는 종양의 병리학적 특징과 장기 특이적 세포 계통을 유지할 수 있는 일종의 3D 세포 배양 모델입니다. 예시 프로토콜에서는 과학자들이 유전자 조작 마우스 모델로부터 전립선 종양으로부터 오가노이드를 생성하는 것을 볼 수 있습니다.

프로토콜

여기에 설명된 동물 절차는 뉴욕 버팔로에 있는 로스웰 파크 종합 암 센터의 실험실 동물 자원부의 기관 동물 관리 및 사용 위원회(IACUC)의 승인을 받아 수행되었습니다.

참고: 오가노이드 생성을 위해 전립선 또는 전립선 종양을 분리하기 위해 해부할 수컷 마우스는 최소한 성적 성숙 연령(약 8-10주)에 도달해야 합니다. 마우스의 구체적인 연령은 연구마다 다를 수 있습니다. 연령을 선택할 때 고려해야 할 몇 가지 요인에는 전립선 세포 집단의 연령에 따른 변화, 특정 프로모터 주도 Cre 전이유전자의 연령에 따른 발현, 특정 GEMM의 전립선 종양 진행 속도 등이 있습니다.

참고: 그림 1은 종양 오가노이드 생성 절차에 대한 그림 설명을 보여줍니다.

1. 준비

1. Drost et al.에 따라 다음과 같은 변형으로 마우스 전립선 오가노이드 배지를 준비합니다. Noggin 및 R-Spondin에 대해 재조합 단백질 대신 컨디셔닝 배지를 사용하고 Noggin 및 R-Spondin ....

결과

그림 1: 전립선 종양 오가노이드 생성을 위한 프로토콜의 흐름도. 전립선 종양을 절개한 후 조직을 1mm 조각으로 다집니다. 콜라겐분해효소에서 종양 조각을 소화하고, 세포를 모으고, 트립신에서 소화하여 단일 세포 현탁액을 얻습니다. 세포를 계수한 후 1.0 x 10⁶ cell/mL 세포 농도에 필요한 매트릭스 부피를 재현탁합니다. 드롭 와이즈 방법을 사용하여 접시에 접시 돔을 만듭니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
0.25% 트립신+2.21mM EDTA	시그마	25-053
대답83-01	메드켐익스프레스	하이-10432
고급 DMEM/F12+++	지브코	12634
분석 저울	메틀러 톨레도	30216623
B27 (50배)	지브코	17504044
콜라겐분해효소 II	지브코	17101015
EHS 육종 매트릭스, Pathclear Lot#19814A10	Trevigen에서 제조	프레더릭 국립연구소(Frederick National Laboratory)의 국립암연구소(National Cancer Institute)에서 요청	국립 암 연구소(National Cancer Institute)의 보조금 보유자는 매트릭스를 요청할 수 있습니다.
헤페스 (1M)	시그마	제25-060
인간 재조합 표피 성장 인자(EGF)	페프로텍	AF-100-15
L-글루타민(200mM)	시그마	제25-005
N-아세틸-L-시스테인	시그마	A9165
페니실린-스트렙토마이신	시그마	P4333
정밀 저울	메틀러 톨레도	30216561
단일 가장자리 탄소 면도날	피셔브랜드	12-640
Y-276632 (암석 억제제)	에이펙스바이오	A3008 (영어

년 년 호 호 년 )