마우스 헤드포스트 이식: 설치류의 머리 고정 방법

초록

출처: França de Barros, F., et al. 자유롭게 행동하는 마우스의 장기 감각 충돌. J. Vis. 특급 (2019).

이 비디오는 쥐 모델의 헤드포스트 이식 수술을 보여줍니다. 헤드포스트는 머리를 고정하여 실험 중에 마우스를 구속하는 데 사용될 뿐만 아니라 자유롭게 움직이는 동물에 머리 장치를 안전하게 부착하는 데에도 사용됩니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 헤드포스트 이식 수술

참고: 멸균 기구의 사용을 보장하고 다른 구역에서 수술 및 회복을 준비하십시오. 마스터하면 이식 절차는 약 30분 동안 지속됩니다.

1. 진통의 경우 수술 시작 30분 전에 부프레노르핀(0.05mg/kg)을 피하주사하고 동물을 집 우리에 다시 넣습니다.
   메모: 부프레노르핀의 진통 효과는 시술이 끝난 후 한참 후인 약 12시간 동안 지속됩니다. 우리의 경험에 비추어 볼 때, 생쥐는 이 중재와 관련된 고통의 징후를 보이지 않지만, 수술 후 24시간 후에 0.05mg/kg 부프레노르핀을 후속 투여하는 것이 권장된다.
2. 2.5%–3% 이소플루란 가스로 챔버에서 동물을 마취합니다. 3분 정도 기다렸다가 챔버 내부의 호흡과 움직임 부족을 관찰하여 마우스가 제대로 마취되었는지 확인합니다. 발열 패드가 있는 수술대 위의 콧방울에 마우스를 갖다 대고 디지털 간 핀치를 통해 금단 반사가 없는지 확인하고 이소플루란을 1.5%로 낮춥니다.
3. 전기 면도기를 사용하여 마우스의 머리를 면도하십시오. 무균 환경을 얻으려면 면도 부위를 요오드 용액으로 문지른 후 70% 알코올로 문지릅니다. 이 절차를 두 번 더 반복합니다.
4. 국소 마취를 위해 머리 피부 아래에 리도카인 하이드로클로라이드(2%, 2mg/kg)를 주사하고 효과가 시작될 때까지 5분 동안 기다립니다. 건조로 인한 눈 손상을 방지하려면 국소 안과 수의사 연고로 마우스의 눈을 덮으십시오.
5. 뭉툭한 집게로 머리 뒤쪽 피부를 잡고 뭉툭한 가위(또는 메스)로 약 1.5cm의 세로로 절개하여 두개골을 노출시킵니다.
6. 메스의 도움으로 골막을 긁습니다. 두개골에서 약간의 출혈이 시작되면 헤드포스트의 고정이 손상될 수 있으므로 너무 세게 긁지 않도록 주의하십시오.
7. 두개골 중앙에 녹색 활성제(재료 표 참조) 한 방울을 바르십시오. 이것은 뼈 투과성을 증가시켜 시멘트의 고정을 향상시킬 것입니다.
8. 시멘트 준비: 폴리머 한 스푼(재료 표 참조)과 단량체 5방울 및 촉매 1방울을 혼합합니다. 브러시를 사용하여 람다와 브레그마 두개골 랜드마크 사이에 시멘트 혼합물을 넉넉하게 바르십시오.
9. 람다에서 브레그마로 이동하는 스와이프 동작으로 시멘트 위에 헤드포스트를 빠르게 놓습니다. 헤드포스트를 배치한 후 아래쪽 부분에 더 많은 시멘트를 바르면 헤드포스트가 두개골에 제대로 부착되도록 합니다. 적절한 고정을 보장하려면 다음 단계를 계속하기 전에 시멘트가 충분히 도포되고 건조되었는지 확인하십시오.
   메모: 이 고정 절차를 사용하면 헤드 포스트가 벗겨지지 않고 장기적이고 반복적인 테스트가 가능합니다. 우리 손에서 헤드포스트 제거는 <10%입니다.
10. 혼합물의 부드러운 일관성을 가능하게 하는 분말 대 액체 비율을 적용하여 수지 혼합물을 준비합니다. 시멘트가 적용된 곳과 헤드포스트 주위를 코팅하여 표면을 보호하기 위해 수지를 바르십시오.
11. 레진이 마를 때까지 3분 정도 기다렸다가 모노필라멘트 봉합사로 귀 뒤쪽 피부를 닫습니다. 면봉으로 희석된(10%–20%) 요오드 용액을 작동 부위에 도포합니다.
    메모: 피부가 수지에 달라붙지 않도록 하십시오.
12. 저체온증을 피하기 위해 마취를 끄고 동물을 빨갛고 따뜻한 조명 아래에 두십시오. 축축한 음식과 하이드로겔 또는 젤 기반의 다른 수원을 케이지 바닥에 놓습니다. 마우스가 의식을 되찾을 때까지 마우스를 방치하지 마십시오. 동물이 절차에서 완전히 회복되자마자(보통 30분에서 1시간 후) 사회적 상호 작용을 자극하기 위해 3-4명씩 그룹을 지어 우리에 넣으십시오.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
무딘 가위	FST
촉매 V	Sun Medical, 일본	LX22	Parkell 생체 재료, 키트 n°S380
덴탈론 플러스	헤레우스	37041
Green 활성제	Sun Medical, 일본	VE-1	Parkell 생체 재료, 키트 n°S380
모노머	Sun Medical, 일본	MF-1	Parkell 생체 재료, 키트 n°S380
오크리겔	티엠랩	10779	안과 수의사 연고
폴리머 L형 클리어(시멘트)	Sun Medical, 일본	TT12F	Parkell 생체 재료, 키트 n°S380

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