세포의 복강 내 주입: 쥐 모델의 복막 지방 조직에 암세포를 전달하는 방법

초록

출처: Krishnan, V. et al. 복막 지방에서 은하수 반점 구조의 난소암 전이성 집락화를 연구하기 위한 접근 방식. J. Vis. 특급. (2015년)

이 비디오에서는 복막 지방 조직에서 난소암 세포의 집락화와 그에 따른 전이를 연구하기 위해 마우스 모델에서 난소암 세포 현탁액의 복강 내 주사를 수행합니다.

프로토콜

동물과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 세포의 복강내 주사

참고: 실험에서 마우스는 병원체 노출 위험을 제한하기 위해 배리어 시설 내의 층류 기류 또는 생물 안전 캐비닛에서 처리됩니다. 이 기술을 명확하게 보여주기 위해 첨부된 비디오의 절차는 동물 작업이 승인된 실험실에서 수행되었습니다.이 특정 기술은 동물을 마취시킬 필요가 없습니다. 승인된 프로토콜에 따라 살아있는 동물에 대해 이 기술을 수행합니다. 이 연구를 위해 적절한 마우스 균주를 사용하십시오. 예를 들어, 인간 난소암 세포(SKOV3ip.1 및 HeyA8) 집락화 연구를 위해 면역이 저하된 흉선 누드 마우스를 사용합니다. 마우스 난소암 세포(ID8) 집락화 연구를 위해 면역 능력이 있는 C57BL/6 마우스를 사용합니다.

1. 난소암 세포의 단세포 현탁액 500μl를 주사기에 넣고 멸균 뚜껑이 있는 25G 바늘을 넣습니다. 이것은 주입 전에 세포 전단을 줄입니다.
2. 목덜미를 잡고 손바닥과 검지를 사용하여 꼬리를 잡고 왼손으로 마우스를 구속할 때 약지와 새끼 손가락 사이에 왼쪽 뒷다리를 고정합니다(왼손으로 마우스를 구속할 때).
   알림: 복부 장기에 외상을 입히지 않으려면 주사 중에 마우스가 움직이지 않도록 잘 제지하십시오.
3. 무릎 바로 위의 복부를 가로지르는 선을 상상하고 동물의 오른쪽과 정중선에 가까운 점을 찾습니다. 진입 지점은 마지막 유두의 두개골이며 약간 내측입니다.
   메모: 마우스의 오른쪽에 바늘을 삽입하면 맹장을 피할 수 있고 장을 뚫을 위험을 줄일
수 있습니다.
4. 마우스 복부의 아래쪽 측면 영역에 바늘을 약 0.5cm 깊이까지 삽입합니다. 플런저를 뒤로 당겨 바늘이 혈관이나 기타 복막 기관을 관통하지 않았는지 확인합니다.
   1. 유체가 흡입되면 주사기(및 샘플)를 폐기하십시오. 녹갈색 또는 노란색 흡인은 각각 장 또는 방광으로 바늘이 침투했음을 나타냅니다.
5. 느리고 일정한 압력을 사용하여 샘플을 주입합니다. 바늘을 빼고 마우스를 케이지로 되돌립니다. 날카로운 용기에 폐기하기 전에 주사기의 뚜껑을 다시 닫지 마십시오.
6. 주사 후 특정 시점에서 CO₂ 질식 및 중요한 장기 제거를 통해 마우스를 희생시킵니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
DMEM을 참조하십시오.	코 닝	10-013-이력서
PBS (PBS)	코 닝	21-040-이력서	칼슘과 마그네슘 없음
26 게이지 바늘	BD (영어)	329652