바이오뱅킹을 위한 전립선암 조직 샘플링: 신선한 종양 조직에서 생검 펀치를 제거하기 위한 MRI 유도 표적 기술

초록

출처: Heavey, S. et al. 전립선암 바이오뱅킹을 위한 샘플링 절차를 안내하기 위한 자기 공명 영상 및 생검 데이터 사용. J. Vis. 특급. (2019년)

이 비디오는 샘플링을 위해 전립선 조직의 특정 종양 함유 영역을 표적으로 하는 MRI 데이터 기반 기술을 보여줍니다. 수집된 생검 검체는 바이오뱅킹 목적으로 보관하거나 후속 다운스트림 분석에 사용할 수 있습니다.

프로토콜

인간 참가자와 관련된 모든 절차는 인간 복지를 위한 제도적, 국가적, 국제적 지침에 따라 수행되었으며 지역 기관 검토 위원회의 검토를 거쳤습니다.

1. 전립선 슬라이싱 장치

1. 전립선 슬라이싱 장치(Table of Materials)를 구입하십시오. 또는 3D 프린터를 사용하여 블레이드 핸들을 인쇄합니다.

2. 종양 표적화

1. 진단 생검에 의해 표시된 지표 병변(예: 왼쪽 후방)을 식별하기 위해 임상 기록을 검토하십시오.
2. MRI 이미지를 검토하여 위 종양의 위치를 측정합니다.
   1. 종양이 축 평면에서 가장 잘 보이는 서열(예: T2 가중치)을 찾습니다.
   2. 축 이미지를 스크롤하여 종양이 가장 큰 이미지를 찾고 참조용으로 이미지를 인쇄합니다.
   3. 해당 관상 이미지에서 전립선 기저부에서 선택한 축 위치까지의 거리와 정점에서 기저부까지의 전립선 전체 길이(mm)를 측정하고 참고용으로 인쇄합니다.

3. 전립선 채취

1. 환자 메모를 확인하여 이 절차 및 모든 후속 연구 응용 프로그램에 대해 적절한 정보에 입각한 동의를 얻었는지 확인하십시오.
2. 근치적 전립선 절제술 후에는 전립선을 마른 냄비에 모으십시오. 포르말린이나 다른 정착제가 전립선에 첨가되지 않았는지 확인하십시오.
3. 샘플링을 위해 적절한 멸균 장소(예: 병리학 실험실의 층류 후드)로 이송합니다.
4. 새로운 조직이 필요한 경우 가능한 한 빨리 샘플링을 진행하십시오.
   참고: 특정 응용 분야(예: RNA만큼 빨리 분해되지 않아야 하는 DNA 평가)의 경우 검체를 냉장 보관하고 다음날 검체를 채취하는 것이 적절할 수 있습니다.

4. 표본 준비

1. 멸균 기술을 사용하여 현지 오염 제거 절차에 따라 층류 후드와 전립선 절단 장치를 준비합니다. 여기에서 70% 에탄올을 분사하고 모든 표면을 닦습니다. 멸균 일회용 바늘과 메스를 사용하십시오. 슬라이서 블레이드를 최대 세 번까지 사용하십시오. 사용 후에는 뜨거운 비눗물로 씻은 다음 70% 에탄올을 뿌리고 닦으십시오.
2. 표준 저울을 사용하여 전립선(g)의 무게를 잰다.
3. 전립선에 잉크를 칠합니다. 왼쪽은 파란색 잉크로, 오른쪽은 검은색 잉크로 칠합니다. 전체 캡슐과 정액 소포를 잉크로 덮어 나중에 수술 가장자리를 표시합니다.
   참고: 수동 입력 절차는 지역마다 다를 수 있으며 그에 따라 수정될 수 있습니다.

5. 전립선 슬라이스

1. 벽을 스탠드 바닥에 수직으로 삽입하여 슬라이싱 장치를 조립합니다(그림 1A).
2. 전립선은 기저부와 정점이 반대쪽 벽을 향하도록 배치하고 뒤쪽은 아래, 앞쪽은 위로 향하게 합니다. 전립선 주위에 금색 핀을 꽂습니다. 필요한 경우 전립선을 안쪽으로 약간 밀어 꼭 맞도록 하면 슬라이스하는 동안 전립선을 지지할 수 있습니다.
3. 자를 사용하여 기저부에서 정점까지의 전립선 길이를 측정하고 MRI로 측정한 전립선 길이와 비교합니다. 전립선이 수축한 경우, 기저부에서 대상 횡절편까지의 예상 거리에 대해 임시 보정을 적용합니다. 예를 들어, MRI 이미지에서 전립선의 전체 길이가 50mm인데 이 시점에서 자로 측정했을 때 45mm로 축소된 것으로 표시되면 예상되는 절개 위치를 10% 줄입니다.
4. 베이스에서 원하는 가로 슬라이스까지 측정합니다. 이 측정값에 가장 가까운 핀을 선택하여 슬라이스합니다.
5. 부상을 방지하기 위해 체인 장갑을 착용하고 슬라이싱 장치(그림 1B)를 잡고 식별된 핀의 양쪽에 블레이드를 놓고 스페이서를 사용하여 블레이드를 5mm 간격으로 유지합니다. 긴 스트로크로 블레이드를 천천히 그리고 단단히 아래, 앞, 뒤로 움직여 슬라이스를 취합니다(그림 1C). 장치를 분해하기 전에 전체 슬라이스가 분리되었는지 확인하십시오.
6. 벽과 핀을 제거하고 장갑을 사용하여 멸균 된 코르크 보드 시트에 슬라이스를 조심스럽게 꺼냅니다.

6. 조직 샘플링

1. 횡방향 슬라이스를 육안으로 검사하고 축방향 MRI 영상과 비교합니다. 어떤 경우에는 종양 부위가 주변 조직보다 창백하게 보일 수 있습니다.
2. 가로 슬라이스를 부드럽게 촉진합니다. 어떤 경우에는 종양이 주변 조직보다 더 단단하게 느껴질 수 있습니다.
3. 축 방향 MRI 이미지를 가이드로 사용하여 샘플링할 영역을 하나 이상 선택합니다.
4. 원하는 조직 부위에 생검 펀치를 맞힙니다.
   1. 6mm 펀치를 사용하여 원하는 조직 부위를 아래로 누릅니다.
   2. 티슈 펀치를 그 자리에서 비틀어 코르크에 대고 아래로 당겨 완전히 분리하고 필요한 경우 날카로운 메스를 사용하여 분리합니다.
   3. 펀치를 제거하고 플런저를 사용하여 배출하여 필요에 따라 튜브/금형에 넣습니다.
   4. 필요에 따라 추가 종양 및 양성 샘플에 대해 별도의 멸균 생검 펀치를 사용하여 반복합니다. 펀치를 맞은 구멍에 빨간색으로 잉크를 칠합니다.
   5. 각 펀치의 위치와 전립선의 무게 및 조직의 색/단단함에 대한 관찰 사항을 기록하십시오.

결과

그림 1: 전립선 절단 장치.(A) 벽은 바닥에 수직으로 삽입되고 금색 핀은 전립선을 둘러싼 바닥에 삽입됩니다 (전립선은 그림에 표시되지 않음). (B) 교체 가능한 평행 블레이드가 블레이드 핸들에 삽입됩니다. (C) 칼날은 전립선의 5mm 부분을 절단하기 위해 금색 핀 사이를 통과합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
6mm 생검 펀치	피셔 사이언티픽	13404607	6mm 조직 샘플을 제거하기 위한 일회용 생검 펀치
검정 잉크	라이카 바이오시스템즈	3801753	조직 표시 & 여백 염료
파란색 잉크	라이카 바이오시스템즈	3801751	조직 표시 & 여백 염료
체인메일 핸드 장갑	아크	1456803	슬라이스 중 손을 보호하기 위한 체인메일 장갑
코르크 보드	피셔 사이언티픽	12396447	다음 샘플링 절차에 전립선을 고정하기 위한 코르크 보드
바늘	SLS(과학 실험실 용품)	SYR6112	샘플링 후 코르크 보드에 조직을 고정하는 데 사용하는 멸균 바늘
전립선 슬라이스 aparatus	Insitute of Cancer Research, 런던	NA - MTA에서 취득해야 합니다.	슬라이서 핸들, 블레이드, 스페이서, 베이스, 벽 및 핀이 포함된 키트