마우스 비뇨생식기 계통에서 전립선 추출: 수컷 마우스의 다른 비뇨기 및 생식기 기관에서 전립선을 분리하는 기술

동물과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 비뇨생식기계(UGS) 해부

참고: 회로도는 그림 1에 나와 있습니다.

1. CO₂ 흡입 안락사 방법 또는 다른 승인된 기술을 사용하여 3개월 된 수컷 C57BL/6 마우스를 안락사시킵니다.
   메모: 3개월에서 12개월 사이의 마우스를 실험에 성공적으로 사용할 수 있습니다. 나이가 많은 마우스(> 6개월)는 UGS 주변에 더 많은 지방이 있을 가능성이 높으므로 이를 제거해야 합니다. 엽의 식별 및 분리는 3개월 미만의 마우스에서 어려운 경우가 많습니다. 다른 균주도 실험에 사용할 수 있습니다.
2. 마우스를 등에 눕히고 동물의 복부 쪽이 노출되도록 핀을 사용하여 다리를 고정합니다.
3. 마우스의 복부에 70% 에탄올을 뿌리고 깨끗하게 닦습니다.
   메모: 절개 전에 복부 털을 면도할 필요는 없습니다.
4. 중간 정도의 뭉툭한 집게로 근육층과 함께 복부의 피부를 들어 올리고 가위를 사용하여 복부를 거꾸로 Y자 모양으로 절개합니다.
   1. 먼저 날카로운 가위로 음경 바로 위에서 흉골까지 똑바로 절개합니다(그림 2a).
   2. 절개 부위 기저부에서 각 발가락을 향해 허벅지까지 자릅니다(그림 2b). 복부 전체를 보기 위해 양쪽과 아래쪽의 피부를 뒤로 접습니다(그림 2c-e).
      메모: 절단 크기는 마우스의 나이와 크기에 따라 다릅니다. 초기 직선 절개의 크기는 마우스의 크기에 따라 1.5cm에서 4cm까지 다양할 수 있습니다.
5. 다른 장기 위로 이동하여 UGS를 노출합니다. 갈색-노란색 장을 들어 올려 움직입니다(그림 2f). 집게로 복부 지방 패드(불투명한 흰색 해면 조직)를 집어 옆으로 움직입니다(그림 2g).
   메모: UGS는 정낭, 요도, 전립선, 정관(vas deferens) 및 방광으로 구성됩니다. 그것은 불투명한 흰색 반원형 아치(정낭)의 특징적인 쌍으로 식별할 수 있으며, 액체로 채워진 방광 주머니가 기저부에 부착되어 있습니다. 정낭 바로 아래에 위치한 반투명 조직이 전립선입니다.
6. UGS를 찾아 뭉툭한 집게로 방광을 단단히 잡고 전체 UGS를 마우스 복부에서 위로 들어 올립니다.
   메모: 방광이 가득 차면 먼저 작은 주사기로 방광을 배출하여 겸자를 더 잘 잡고 방광 파열 위험을 줄이십시오.
7. 방광을 계속 당겨 방광과 전립선 아래에 가위를 밀어 넣고 척추까지 자릅니다. 복강에 남아 있는 연결을 잘라냅니다(그림 2h 및 2i). 실수로 전립선 조직을 절단하지 않도록 UGS에 너무 가깝게 절단하지 않도록 주의하십시오.
   메모: UGS 아래에서 절단하는 동안 가위를 마우스 뒤쪽까지 끝까지 삽입하여 절단이 척추도 스냅하도록 해야 합니다. 이 방법을 사용하면 한 번의 절단으로 UGS와 복강 사이의 거의 모든 연결을 절단하여 마우스에서 조직을 추출하는 데 필요한 시간을 줄일 수 있습니다.
8. UGS를 제거하고 6cm 페트리 접시(그림 2j 및 2k)에 인산염 완충 식염수(PBS) 또는 Dulbecco의 변형된 Eagle 배지(DMEM, 고포도당)의 2-6mL(조직을 덮을 수 있을 만큼)에 넣고 해부 현미경(10X 배율)으로 이동합니다.
   메모: 나머지 단계에서 필요에 따라 해부 매체를 변경합니다.

그림 1: 쥐의 비뇨생식기 계통 해부와 전립선 분리를 보여주는 개략적인 흐름도. 섹션 1에 설명된 프로토콜 단계에 대한 순서도

그림 2: 마우스 UGS 해부. 생후 3개월 된 쥐의 UGS 해부 단계별 이미지: (a 및 b) 절개, (c-e) 복부 부위를 노출시키기 위해 피부를 뒤로 당기기, (f) 장 이동, (g) 복부 지방 패드 이동, (h 및 i) 복강에서 UGS 추출, (j) 추출된 UGS, (k) 다음과 같이 표시된 다른 장기 및 조직과 함께 추출된 UGS: SV (노란색) = 정낭; P (빨간색) = 전립선; F (보라색) = 지방; V (하늘색) = 정관; B (녹색) = 방광.