Micromanipulation을 사용한 단일 세포 샘플링: 암세포 현탁액에서 단일 세포를 분리하는 기술

Abstract

출처: Chen S. et al. 단일 세포 다운스트림 특성화를 위한 표적 세포 사전 농축 및 전체 게놈 증폭. J. Vis. 특급. (2018년)

이 동영상은 다운스트림 분석을 수행하기 위해 표적 세포 풀에서 단일 세포를 분리하는 기술을 설명합니다. 이 방법에서는 현미경에 장착된 마이크로 매니퓰레이터를 사용하여 단일 표적 세포를 고정밀 분리합니다.

Protocol

1. 단일 셀 샘플링

1. 마이크로 조작
   참고: 전체 게놈 분석(WGA)과 같은 다운스트림 응용 분야를 허용하기 위해 분리된 단일 세포를 2μL의 세포 용해 마스터 믹스에 추가합니다. 처리할 세포의 수에 따라 마스터 믹스를 준비합니다. 피펫팅으로 인한 손실에 대한 추가 부피를 계산하고 Cell Lysis 마스터 믹스를 얼음 위에 놓습니다.
   1. 세포 용해 마스터 믹스(WGA 키트의 구성 요소, 재료 및 시약 표)를 준비합니다. 간단히 2.0 μL의 반응 완충액, 1.3 μL의 옥틸페녹시폴리에톡시에탄올(10% 용액), 1.3 μL의 4-(1,1,3,3-테트라메틸부틸) 페닐-폴리에틸렌 글리콜(10% 용액), 2.6 μL의 proteinase K 용액 및 12.8 μL RNase/DNase-free water를 혼합하여 10개 시료(총 부피 20 μL)에 대한 마스터 믹스를 얻습니다.
      메모: 더 많은 샘플의 경우 그에 따라 부피를 늘리십시오.      
   2. 그리스 펜을 사용하여 셀 현탁액을 제자리에 고정하는 영역을 그립니다. 세포 밀도가 너무 높을 경우 면적과 부피를 조정합....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
인산염 완충 식염수(1x PBS)	써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific	10010-015
Vacutainer EDTA(또는 Na-heparin) 튜브	BD (영어)	366450(또는 366480)	타겟 세포의 ex vivo 포획을 위한 반응 튜브로 사용
파스퇴르 피펫 150 mm	볼락	D810	C&R에 세포를 소량 적용하는 데 사용됩니다.
그리스 펜	다코	시즌 2002	세포 현탁액을 제자리에 고정하기 위해 유리 슬라이드에 사용
Mikromanipulator MMJ 및 CellTram vario가 장착된 Axiovert M200	자이스/에펜도르프		즉시 micromanipulation 사용
마이크로 모세관(직경 25μm), CustomTip 유형 I	에펜도르프	930001201	세포를 미세 조작하는 데 사용됩니다.
0.2 mL PCR 튜브	바이오짐	710920