방법 논문

기능적 화학저항성 특성화: 클론생성 분석을 사용하여 암세포의 약물 내성을 평가하는 방법

2023년 4월 30일

이 논문에서

초록

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

출처: Mohr, L. et al. 항유사분열제 Docetaxel에 대한 내성의 전립선암 세포 모델 생성. J. Vis. 특급 (2017년)

이 동영상은 콜로니 형성 분석을 사용하여 전립선암 세포의 화학 요법 약물 내성을 평가하는 방법을 설명합니다. 이 분석은 암세포에서 화학저항성의 새로운 분자 및 세포 메커니즘을 확인하기 위한 기능적 도구로 사용할 수 있습니다.

프로토콜

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. 콜로니 형성 분석에 의한 후천성 도세탁셀 내성의 기능적 특성화

참고: 이 프로토콜에서 화학저항성은 콜로니 형성 분석을 사용하여 평가되었습니다. 세포 생존율을 평가하는 데 사용되는 대체 방법(즉, MTS 분석)은 연구자의 선호도에 따라 사용할 수 있습니다.

  1. 웰당 2mL의 배지를 사용하여 6웰 플레이트의 웰당 2,000개 세포(DU145 또는 22Rv1, 부모 및 도세탁셀 내성)를 플레이트화합니다.
  2. 24 시간 후, Docetaxel의 농도를 증가시키는 것을 추가하십시오 (부모 세포 : 0.25, 0.5, 1, 2.5 및 5 nM; DR 셀: 50, 125, 250, 500 및 1,000nM). DU145 및 22Rv1 세포주 모두에 사용됩니다. DMSO는 가장 높은 도세탁셀 용량에 사용되는 것과 동일한 부피의 대조군으로 하나의 웰에만 추가합니다.
  3. 72시간 후, 약물 함유 배지를 흡인하고 새로운 도세탁셀이 없는 배지를 추가합니다.
  4. 현미경으로 집락이 보일 때까지 1-2주 동안 플레이트를 배양합니다.
  5. 집락을 염색하려면 2-3mL PBS로 부드럽게 세척하고 조직 배양 후드 또는 흄 후드 내부에서 20분 동안 2-3mL 결정 바이올렛 용액(10% 포르말린 중 0.1% w/v)으로 배양합니다.
  6. 염색 용액을 제거하고 2-3 mL의 H2O로 플레이트를 세척하고 H2O 및 공기 건조 플레이트를 제거합니다.
  7. 웰을 시각화하고 마커 펜을 사용하여 수동으로 콜로니를 계수하여 결과를 분석하고(동일한 콜로니를 두 번 계수하지 않기 위해) 세포 생존율의 백분율을 그래프로 표시합니다. 그림 표현을 위해 플레이트의 디지털 이미지를 촬영합니다(그림 1A).

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

결과

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
그림 1: Docetaxel-resistant cell model의 기능적 및 표현형 특성화.(A) 72시간 동안 표시된 도세탁셀 농도로 처리된 부모 및 도세탁셀 내성 세포의 대표적인 집락 형성 분석. 모든 처리 농도에 대한 집락의 비율이 포함된 그래프에 표시됩니다. 실험은 3회이며 데이터는 평균 ± SD를 나타냅니다. 스케일 바 = 5mm. (B) ABCB1, GATA2, CK19 및 CDH1의 qRT-PCR로 정량화된 DR/부모 상대 mRNA 폴드 증가가 표시됩니다. 모든 qPCR 원시 데이터는 Actin으로 정규화됩니다(자세한 내용은 프로토콜 참조). 실험은 삼중으로 이루어지며 데이터는 SD± 평균을 나타냅니다. *p <0.05.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

공개 사항

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
선언된 이해 상충이 없습니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
DU145 셀 증권 시세 HTB-81
22Rv1 세포 증권 시세CRL-2505
도세탁셀 Selleck 화학 물질 S1148 DMSO에서 (10mM)
조직 배양 플라스크 150 sq cm 송골매355001
6웰 조직 배양 플레이트 송골매353046
RPMI 1640 미디엄 지브코1187509310% FBS 및 1% 페니실린/스트렙토마이신 보충
파운데이션 B 소 태아 세럼 쌍둥이자리900208
1X 인산염 완충 식염수(PBS) 코 닝 21-040-CM
0.05%트립신-EDTA 지브코 제25300-062
페니실린-스트렙토마이신 지브코15140122
크리스탈 바이올렛 시그마-알드리치C0775
10% 포르말린 용액 시그마-알드리치HT501128
표시기 표시기 (영문) 호

재인쇄 및 허가

이 JoVE 논문의 텍스트 또는 그림 재사용 허가 요청

허가 요청

태그

관련 논문