신캡슐 종양 이종이식: 전립선 발암을 평가하기 위한 실험 동물 모델을 생성하는 기술

초록

출처: Nicholson, T. M. et al. 전립선 발암 및 양성 전립선 비대증의 평가를 위한 신장 캡슐 이종 이식 및 피하 펠렛 이식. J. Vis. 특급 (2013년)

이 비디오에서는 면역이 저하된 수혜자 마우스의 신낭에 인간 유래 전립선암 조직 이식편을 이식하는 방법을 보여줍니다. 이 기술은 종양 진행을 평가하고 새로운 치료 전략을 개발하는 데 사용할 수 있습니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 외과적 절차: 신장 캡슐 이종 이식

1. 마취를 하기 전에 건강과 웰빙을 보장하기 위해 마우스를 관찰하십시오.
2. 3-5%에서 이소플루란 마취를 유도하기 위해 마우스를 챔버에 넣습니다. 동물이 움직임을 멈추고 호흡수가 감소하면 엎드린 자세로 콧방울로 옮기고 마취를 1-3%로 유지합니다.
3. 필요한 경우 이발기를 사용하여 마우스 뒷면을 면도합니다. 이것은 흉선 누드(nu/nu) 마우스를 사용할 때는 필요하지 않습니다.
4. 마취의 적절성을 평가하기 위해 확장된 뒷발의 웨빙에 강한 압력을 가합니다. 마우스가 압력에 반응하면 마취가 효과를 발휘하는 데 더 많은 시간이 필요합니다. 필요한 경우 적절한 마취를 달성하기 위해 마취 흐름을 약간 조정합니다.
5. 마우스가 적절하게 마취되면 수술 부위를 수술용 요오드(베타딘) 용액과 70% 알코올로 소독합니다.
6. 멸균 장갑과 가운을 착용하십시오.수술 부위에 멸균 커튼을 바르십시오. 톱니가 있는 집게로 뒤쪽 피부를 들어 올리고 거친 가위를 사용하여 2-3cm의 등쪽 정중선을 절개합니다.
7. 뭉툭한 가위나 프로브를 사용하여 기저의 진피를 체벽에서 분리합니다(양측 이식의 경우 절개 부위 양쪽 또는 편측 이식의 경우 한쪽 면).
8. 마우스를 측면 위치로 재배치하고 근육 벽을 통해 신장 프로파일을 확인하여 신장의 위치를 식별합니다. 엄지와 검지로 복부를 부드럽게 수동으로 누르면 내부 장기를 시각화하는 데 도움이 될 수 있습니다.
9. 가는 홍채 가위를 사용하여 주요 혈관과 척추 신경을 피하도록 주의하면서 척추와 평행하게 체벽을 1cm 절개합니다. 초기 절개 부위에 가위를 놓은 후 가위를 부드럽게 더 넓게 열어 절개 부위를 1.5-2.0cm(신장의 긴 축보다 약간 더 긴)로 넓힙니다.
10. 검지와 엄지손가락을 사용하여 신장 양쪽의 근육 벽 바깥쪽으로 부드러운 압력을 가하여 신장을 외부로 만듭니다. 체벽에 놓일 외부 신장 아래의 피부 가장자리를 밀어 넣습니다. 신장이 외부로 배출되는 동안에는 멸균 식염수를 도포하여 신낭의 수분을 유지하십시오.
11. 가는 #5 겸자를 사용하여 신장 실질에서 신장 캡슐을 부드럽게 들어 올리고 가는 메스로 캡슐을 2-4mm 절개합니다. 절개 부위의 크기는 이식편의 크기에 따라 결정되지만 캡슐의 무결성을 유지하기 위해 최소화해야 합니다.
12. 신장 표면에 접하는 캡슐 아래의 둥근 닫힌 끝으로 얇게 그려지고 화염 광택 처리 된 유리 파스퇴르 피펫을 조작하십시오. 이식편을 위한 작은 캡슐 주머니를 부드럽게 열고 신장 실질이 손상되지 않도록 세심한 주의를 기울입니다.
13. 신장 캡슐의 절단된 가장자리를 가는 집게로 들어 올리고, 이식편을 불에 닦인 유리 피펫을 사용하여 캡슐 아래 주머니에 삽입합니다. 여러 이식편을 신장 캡슐 아래에 놓고 신장 표면에 균일한 간격으로 배치할 수 있습니다.
14. 이식 과정에서 캡슐이 탈수되면 멸균 식염수를 적용하여 촉촉하게 해야 합니다.
15. 이식이 완료되면 절개 부위의 근육 벽 측면을 부드럽게 들어 올려 신장을 체강으로 다시 교체합니다. 이식편이 캡슐 아래에서 미끄러지지 않는지 관찰하십시오.
16. 단일 봉합사(4-0, FS-2 비크릴 봉합사)로 근육 벽을 닫습니다. 수술 절차는 마우스의 위치를 변경하여 반대쪽 신장에서 반복할 수 있습니다.
17. 톱니가 있는 집게를 사용하여 피부 절개 가장자리를 정렬하고 절개 부위를 봉합하기 위해 2-3개의 수술용 상처 클립을 적용합니다. 진통제를 투여하고(피하 주사를 사용하여 5-10mg/kg 카프로펜 사용) 마우스를 회수 케이지의 측면 누운 자세로 놓습니다. l의 열로 체온을 유지하십시오.amp 또는 가열 패드. 15분 이내에 마우스가 완전히 복구되는지 관찰합니다.
18. 다음 24시간 동안 쥐를 관찰하여 수술 후 통증, 출혈 및/또는 기타 합병증의 징후가 있는지 확인해야 합니다. 수술 절개 부위에 감염 징후가 있는지 정기적으로 검사합니다.
19. 수술 후 7-14일 후에 수술용 상처 클립 제거 장치로 상처 클립을 제거합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
멸균 수술 가운	중서부 수의사 공급	350.79866.2
수술용 마스크	중서부 수의사 공급	350.50111.2
멸균 장갑	킴벌리 클라크	55092
Reflex Wound Clipper (반사 상처 클리퍼)	에프에스티	12031-09	상처 클립 크기 대응
Vicryl 봉합사	중서부 수의사 공급	295-92100.2	4-0, FS-2, 흡수성
스트레이트 샤프/블런트 가위	정밀 과학 도구(F.S.T.)	14054-13
Graefe 집게 (톱니, 톱니, 곡선)	에프에스티	11055-10
이소플루란 기화기	수페르아 마취 이노브	VAP3000
인덕션 챔버	수페르아 마취 이노브	해상도644
유리 파스퇴르 피펫	피셔 사이언티픽	S67050	5" 길이
Graefe 집게 (톱니 모양, 곡선형)	에프에스티	11052-10
Graefe 집게 (톱니 모양, 스트레이트)	에프에스티	11050-10
베타딘	웹스터 수의학	TEL.07-836-3379
멸균 식염수	중서부 수의사 공급	제193.74504.3	NaCl 0.9%, 주사 가능
코튼 팁 어플리케이터	중서부 수의사 공급	001.06220.2
상처 클립	브레인트리 사이언티픽	ACS CS	7mm 또는 9mm 클립을 사용할 수 있습니다.
이소플루란	중서부 수의사 공급	193.33161.3
해부 현미경	라이카	패2
작은 쥐 노즈 콘	수페르아 마취 이노브	ACC526
산소 유량계	수페르아 마취 이노브	옥시660
Would Clip Remover (클립 리무버)	에프에스티	12033-00	보편적

년 년 년 년 년 호 년