슬라이드 절편의 탄성 섬유 염색: 위암 전이를 관찰하는 기법

초록

출처: Lei, G. et al. pT3N0M0 위암 조직의 파라핀 함유 슬라이드에 대한 탄성 염색. J. Vis. 특급. (2019년)

이 비디오에서는 위장관 종양 조직에서 얻은 절편의 탄성 염색을 보여줍니다. 이 염색 절차는 미세한 탄성 섬유를 시각화할 수 있게 하고 탄성 층을 넘어 종양 세포의 침입을 결정하는 데 도움이 됩니다.

프로토콜

인간 참가자와 관련된 모든 절차는 인간 복지를 위한 기관, 국내 및 국제 지침에 따라 수행되었으며 지역 기관 검토 위원회의 검토를 거쳤습니다.

1. 염색

1. 염색을 진행하기 전에 티슈 페이퍼로 슬라이드의 티슈 주위에 있는 과도한 용액을 닦아내십시오.
2. 전체 염색 과정에서 슬라이드의 조직이 건조되지 않도록 슬라이드를 실온 및 실온 습도 조건에 놓습니다.
3. 과망간산칼륨 몇 방울로 슬라이드를 5분 동안 산화시킵니다. 과망간산칼륨의 부피가 각 슬라이드의 조직 섹션을 덮을 수 있을 만큼 충분한지 확인합니다.
4. 산화된 슬라이드를 증류수로 Coplin 항아리에 넣고 2-3번 갈아줍니다. 조직의 파란색을 관찰하십시오.
5. 이제 5분 동안 옥살산 몇 방울을 추가하여 이 슬라이드를 표백합니다. 옥살산의 부피가 각 슬라이드의 조직 부분을 완전히 덮을 수 있을 만큼 충분한지 확인하십시오.
6. 슬라이드를 증류수로 채워진 Coplin 항아리에 담가 헹굽니다. 헹굼을 2x-3x 수행합니다.
7. 이제 이 슬라이드를 95% 알코올로 잠시 세척한 다음 슬라이드를 엘라스틴 용액(5g/L)에 8-24시간 동안 담그
   메모: 엘라스틴 용액은 휘발성이고 염색 시간이 비교적 길기 때문에 밀봉 캡이 있는 투명한 유리병과 같은 밀봉된 용기에 탄성 염색이 있는 슬라이드를 담그는 것이 가장 좋습니다. 용기의 용량과 엘라스틴 용액의 부피는 모든 슬라이드를 완전히 잠길 수 있는 한 침지된 슬라이드의 수에 따라 달라집니다.
8. 이 슬라이드를 95% 에탄올에 1-2분 동안 직접 담궈 각 조직 단면을 잘 구별합니다.
   메모: 분화는 조직 부분의 전하의 변화를 말하며, 이는 조직에 흡수된 과도한 염색을 제거하고 색상을 더 선명하게 만듭니다. 엘라스틴 용액 염색 후에는 분화의 어려움을 피하기 위해 샘플을 증류수로 세척해서는 안 됩니다. 필요에 따라 청흑색 탄성 섬유 염색 및 회색 배경을 현미경으로 확인하십시오. 후속 Van Gieson의 카운터 염색도 탄성 염색을 다소 추출할 수 있으므로 조직을 약간 과소 구별하는 것이 좋습니다.
9. 분화 후 이 슬라이드를 증류수로 완전히 헹굽니다.
10. Van Gieson의 용액에서 슬라이드를 1분 동안 대조염색합니다.
    메모: Van Gieson의 용액의 부피는 각 슬라이드의 조직 부분을 완전히 담글 수 있을 만큼 충분해야 합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Elastin-Van Gieson 염색 키트	바소	BA4083B	탄성 섬유, 콜라겐 섬유 및 근섬유의 염색에 사용
에탄올	LMAI 바이오	LM64-17-5	100%