Subculturing and Shipping을 위한 스페로이드 분할: 소장 신경내분비 종양에서 스페로이드를 전파하고 옮기는 절차

초록

출처: Ear, P. H. et al. Establishment and Characterization of Small Bowel Neuroendocrine Tumor Spheroids. J. Vis. 특급. (2019년)

이 동영상은 소장 신경내분비종양세포에서 발달한 스페로이드를 분리하고 증식시키는 전략을 보여줍니다. 이 스페로이드는 소장 신경내분비 종양 마커를 가지고 있으며 증식할 수 있으며 항암제 테스트에 더 많이 사용할 수 있습니다.

프로토콜

1. SBNET 스페로이드 분할

참고: 이것은 확장 및 다른 연구자들과 공유하기 위해 수행됩니다.

1. P1000 피펫을 사용하여 ECM을 기계적으로 절단하고 SBNET 스페로이드가 포함된 ECM을 멸균 1.5mL 튜브로 흡입합니다.
2. 4°C에서 1,000 x g의 원심분리기를 사용하여 모든 상층액을 제거하고 튜브를 얼음 위에 놓습니다.
3. 펠릿에 새 ECM 부피의 2-4배를 추가합니다. 기포가 유입되지 않도록 10회 위아래로 피펫팅하여 새 ECM과 기존 ECM 및 SBNET 스페로이드를 혼합합니다.
4. ECM 및 SBNET 스페로이드 혼합물 5-20 μL를 새 플레이트로 옮기고 ECM이 응고되도록 합니다.
5. 새 SBNET 배지로 덮고 인큐베이터로 옮깁니다. 회수율은 약 95%에서 100%입니다.
6. SBNET 스페로이드를 다른 실험실로 배송하려면 새 ECM이 있는 SBNET 스페로이드를 T25 플라스크로 옮기고 ECM이 응고되도록 합니다.
7. T25 플라스크에 SBNET 스페로이드 매체를 채우고 캡을 단단히 조인 다음 배송 패키지를 준비합니다.
8. SBNET 스페로이드 배양물을 받으면 배양 배지를 제거하고 1.1-1.5단계를 수행하여 SBNET 스페로이드를 다시 배양합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
DMEM을 참조하십시오.	지브코	11965-092	조직 준비를 위한 배지
DMEM/F-12	지브코	제11320-033	오가노이드 배양을 위한 배지
FBS(증권 시세	지브코	16000044	배양 배지용 시약
글루타민	지브코	A2916801	배양 배지용 시약
인슐린	시그마	I0516 (영어	배양 배지용 시약
마트리겔	코 닝	356235	포함 및 앵커할 매트릭스 오가노이드
니코틴아미드	시그마	72340	배양 배지용 시약
펜/스트렙	지브코	15140-122	배양 배지용 시약